背景和目的:在生物制藥領(lǐng)域,蛋白類藥物正處在迅猛發(fā)展時期。據(jù)Drug Bank2017年發(fā)布的最新數(shù)據(jù)表明,有5028種試驗(yàn)藥物和4775種非冗余蛋白（如藥物靶點(diǎn)、酶、轉(zhuǎn)移介質(zhì)、藥物載體等）序列等待進(jìn)一步的評估。日益增長的需求使得優(yōu)化CHO細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng)以高效生產(chǎn)蛋白藥物尤為重要。近年來,瞬時表達(dá)技術(shù)憑借其時間短、費(fèi)用低、產(chǎn)物符合臨床標(biāo)準(zhǔn)的優(yōu)勢,逐漸得到重視和發(fā)展。在規(guī)模化細(xì)胞培養(yǎng)過程中,細(xì)胞凋亡與細(xì)胞存活狀態(tài)、產(chǎn)物質(zhì)量息息相關(guān)。因此,通過過表達(dá)抗凋亡基因以延緩細(xì)胞凋亡、改善細(xì)胞生長狀態(tài)是降低單克隆抗體生產(chǎn)成本的策略之一。此外,據(jù)文獻(xiàn)報道,影響自噬途徑從而延緩細(xì)胞死亡也是重要的方法之一。有研究表明,自噬誘導(dǎo)劑rapamycin可以延長CHO細(xì)胞存活時間,影響穩(wěn)定表達(dá)抗體的細(xì)胞株的產(chǎn)量。anti-PD1單克隆抗體現(xiàn)已被廣泛應(yīng)用于臨床,臨床上目前證實(shí)其可以治療6種癌癥。市場上,已經(jīng)有三家公司獲得FDA批準(zhǔn),可以在市場上銷售anti-PD1單克隆抗體。其它追隨者也處在對這種抗體的不同的研究發(fā)展階段。故而,以anti-PD1為例,研究提高其表達(dá)量的方法具有一定的意義。本文介紹了一種通過共轉(zhuǎn)染瞬時... 

【文章來源】：上海交通大學(xué)上海市 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：69 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

瞬時表達(dá)與穩(wěn)定表達(dá)的步驟流程圖

由自噬有關(guān)蛋白（Atgs）調(diào)控。自噬發(fā)生的膜動態(tài)變化如圖1.2 所示。圖 1.2 自噬的膜動態(tài)變化[39]Fig.1.2 Membrane dynamics of autophagy in yeast and mammals

圖 2.1 轉(zhuǎn)染效率優(yōu)化結(jié)果Fig.2.1 Optimization of transfection efficiency in 3D plot showing the transfectionefficiencies in CHO cells at different DNA: PEI ratios, DNA concentrations and cellconcentrations.3.2 抗凋亡基因質(zhì)粒構(gòu)建


本文編號：3524114