目的:在大多數真核生物基因中,蛋白質編碼序列（外顯子）被非編碼序列（內含子）中斷,在細胞核輸出翻譯成蛋白質之前需要移除細胞核中的內含子。由此說明,pre-mRNA剪接是大多數真核生物基因表達的一個重要步驟,對細胞的生理功能和病理狀態(tài)都有著重要的意義。在近些年的研究中,mRNA水平上的基因表達通常用傳統(tǒng)的生物化學方法進行監(jiān)測。然而,這些方法一般只能在體外進行檢測或受到分子特異性的影響,不能實時準確地監(jiān)測pre-mRNA剪接過程,也不能完全實現在活體中的pre-mRNA剪接成像的研究,所以開發(fā)理想的分子探針實時監(jiān)測pre-mRNA剪接過程是十分必要的。材料和方法:在本研究中,我們首先在熒光素酶基因閱讀框內嵌合了一個人工內含子,構建了一個熒光素酶報告基因（Luc-intron）,同時設立了一個不含內含子的對照熒光素酶報告基因（Luc-control）。我們利用慢病毒系統(tǒng)構建了A549-luc-intron和A549-luc-control兩種穩(wěn)定的細胞系,之后我們采用雙色熒光素酶報告系統(tǒng)方法檢測熒光素酶活性在外源藥物異銀杏雙黃酮（ISO）作用下的藥物劑量和時間的依賴性,并采用RT-PCR對剪... 

【文章來源】：西安電子科技大學陜西省 211工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數】：84 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

不同內含子剪接過程

西安電子科技大學碩士學位論文，依賴的 ATP 穩(wěn)定了分支點和 U2 snRNP 之間的相互作用，導致了 U4， snRNP 復合物的結合[12,13]，這個合成體的多個構象重排隨后產生催化活，其中 U1 和 U4 snRNP 釋放；最后，在 5’和 3’剪接位點的分離和套索產后外顯子連接發(fā)生[14,15]，如圖 1.2 所示 pre-mRNA 的剪接機制。

圖 1.3 雙色熒光素酶報告系統(tǒng)檢測機理素酶基因的優(yōu)點酶基因廣泛應用于很多領域，如標記基因、標記細胞、標記微生基因系統(tǒng)、藥物高通量篩選、活體生物體內成像等。技術相比，熒光素酶基因具有使其更適合成為報告蛋白的幾個特需要外部光激發(fā)，并且在熒光素酶底物，ATP，鎂和氧的存在下波長的光[64]。第二、在熒光素酶底物存在的情況下，熒光素酶的 小時）允許實時測量，因為熒光素酶不會在含有其他報告基因、體外熒光素酶濃度與發(fā)射光峰高之間的關系線性高達 7-8 個數性質潛在地允許在活體中熒光素酶報告基因表達的靈敏無創(chuàng)成像體內使用熒光素酶蛋白質的主要限制是缺乏足夠的靈敏度可用們用于細胞培養(yǎng)和小而透明的生物體[67,68]。然而，現在已經取得平的可見光的若干技術進步。究的主要內容


本文編號：3357669