目的:從家蠅的EST測序數(shù)據(jù)庫中篩選獲得家蠅的CCT（chaperonin containing t-complex polypeptide）基因MD-CCTζ,上傳Gen Bank分析分子特性后,進(jìn)行c DNA克隆、表達(dá);探討MD-CCTζ基因在家蠅不同組織和發(fā)育時期的時空表達(dá)模式;初步研究在不同病原微生物和熱脅迫條件下家蠅3齡幼蟲的MD-CCTζ基因表達(dá)譜的變化。方法:1、MD-CCTζ的序列分析及c DNA克隆、表達(dá)。從課題組前期構(gòu)建的家蠅幼蟲EST數(shù)據(jù)庫中篩選得到家蠅的CCTζ基因序列,通過序列分析,預(yù)測其開放閱讀框,采用BLAST、EXPASY等生物信息學(xué)網(wǎng)站分析預(yù)測MD-CCTζ基因編碼蛋白的結(jié)構(gòu)域,二級及三級結(jié)構(gòu)等;從NCBI上下載其他物種CCTζ基因的氨基酸序列,借助MEGA 6.0軟件采用鄰接法構(gòu)建系統(tǒng)進(jìn)化樹;根據(jù)其c DNA序列設(shè)計引物,PCR擴增MD-CCTζ基因,將目的基因與表達(dá)載體PEASY-E1構(gòu)建重組質(zhì)粒,轉(zhuǎn)化到大腸桿菌BL21（DE3）中,選擇合適溫度、時間使用IPTG誘導(dǎo)重組蛋白,重組蛋白使用His·Tag融合蛋白試劑盒純化。2、家蠅CCTζ基因的時空... 

【文章來源】：貴州醫(yī)科大學(xué)貴州省

【文章頁數(shù)】：63 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

BLAST中MD-CCTζ保守結(jié)構(gòu)域分析

MD-CCTζ蛋白的SignalP-4.1分析結(jié)果

MD-CCTζ蛋白的TMHMM分析結(jié)果


本文編號：3348798