目的研究蝙蝠來源的重癥急性呼吸綜合征（SARS）樣冠狀病毒W(wǎng)IV1刺突蛋白利用浣熊狗血管緊張素轉(zhuǎn)換酶Ⅱ（ACE2）受體侵入細(xì)胞的能力,并探究SARS樣冠狀病毒W(wǎng)IV1潛在的跨宿主傳播風(fēng)險(xiǎn)。方法構(gòu)建來自浣熊狗、果子貍、中華菊頭蝠和人等不同動(dòng)物來源的ACE2表達(dá)質(zhì)粒,轉(zhuǎn)染至293T細(xì)胞并利用免疫印跡方法檢測(cè)其在293T細(xì)胞中的表達(dá)水平;建立SARS冠狀病毒（Tor2株系）及蝙蝠SARS樣冠狀病毒（WIV1株系）假病毒感染系統(tǒng),并進(jìn)行假病毒感染實(shí)驗(yàn);利用假病毒感染系統(tǒng)及熒光素酶報(bào)告基因檢測(cè)WIV1刺突蛋白對(duì)浣熊狗等不同動(dòng)物來源ACE2受體利用能力;構(gòu)建跨膜絲氨酸蛋白酶2（TMPRSS2）質(zhì)粒,并轉(zhuǎn)染至T Rex 293細(xì)胞,借助假病毒感染系統(tǒng)檢測(cè)TMPRSS2對(duì)WIV1侵入能力的影響。結(jié)果本研究所獲贈(zèng)及構(gòu)建的不同動(dòng)物來源的ACE2質(zhì)�？山�(jīng)瞬時(shí)轉(zhuǎn)染至細(xì)胞進(jìn)行表達(dá);與pc DNA3.1載體相比,浣熊狗、中華菊頭蝠、果子貍和人的ACE2均可使蝙蝠SARS樣冠狀病毒W(wǎng)IV1侵入細(xì)胞的能力增加上萬倍,上述ACE2組與載體組的熒光素酶活性差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=27.744、P <0.001,t... 

【文章來源】：中華實(shí)驗(yàn)和臨床感染病雜志(電子版). 2019,13(05)

【文章頁數(shù)】：7 頁

【部分圖文】：

TMPRSS2對(duì)SARS-Co V(Tor2株系）假病毒及蝙蝠SARS樣冠狀病毒W(wǎng)IV1假病毒感染能力的影響

SARS-Co V(Tor2株系）假病毒和SARS樣冠狀病毒W(wǎng)IV1假病毒利用不同動(dòng)物來源ACE2受體侵入細(xì)胞的能力

為進(jìn)一步探究蝙蝠SARS樣冠狀病毒W(wǎng)IV1是否可利用來自浣熊狗的ACE2受體，本研究制備了蝙蝠SARS樣冠狀病毒W(wǎng)IV1假病毒及SARS-C o V(To r 2株系）假病毒（對(duì)照），并利用上述假病毒感染實(shí)驗(yàn)檢測(cè)其對(duì)轉(zhuǎn)染了不同動(dòng)物來源ACE2質(zhì)粒的T Rex293細(xì)胞的侵染能力。結(jié)果顯示，SARS-Co V(Tor2株系）假病毒利用人、果子貍和浣熊狗ACE2侵入細(xì)胞的能力顯著高于pc DNA3.1載體，上述ACE2組與載體組間熒光素酶活性差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=20.871、P<0.001,t=14.911、P<0.001,t=12.511、P<0.0 0 1）；而僅能以極弱的能力利用中華菊頭蝠ACE2受體侵入細(xì)胞，且與載體組間的熒光素酶活性差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=7.619、P<0.001）（圖2A）。本實(shí)驗(yàn)與既往研究一致[5-6]，再次證明本實(shí)驗(yàn)室的ACE2質(zhì)�？烧０l(fā)揮受體功能。此外，與pc DNA3.1載體組相比，浣熊狗、中華菊頭蝠、果子貍和人的ACE2可使蝙蝠SARS樣冠狀病毒W(wǎng)IV1侵入細(xì)胞的能力增加上萬倍，上述ACE2組與載體組間熒光素酶活性差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=27.744、P<0.001,t=18.740、P<0.001,t=32.297、P<0.001,t=15.902、P<0.001）（圖2B）。圖2 SARS-Co V(Tor2株系）假病毒和SARS樣冠狀病毒W(wǎng)IV1假病毒利用不同動(dòng)物來源ACE2受體侵入細(xì)胞的能力


本文編號(hào)：3348668