目的研究siRNA下調(diào)星形膠質(zhì)細胞中第10號染色體同源缺失性磷酸酶-張力蛋白（PTEN）表達對缺氧復氧誘導的細胞凋亡影響。方法分離培養(yǎng)乳鼠星形膠質(zhì)細胞,用攜帶PTEN siRNA的慢病毒載體感染星形膠質(zhì)細胞,經(jīng)缺氧復氧處理后,用Real time PCR和Western blot檢測細胞中PTEN表達變化。MTT測定細胞增殖活力,二硝基苯肼比色法檢測乳酸脫氫酶（LDH）漏出率,流式細胞術測定周期和凋亡變化,Western blot檢測細胞中細胞周期依賴性蛋白激酶4（Cdk4）、p21蛋白水平和胞質(zhì)中細胞色素C（Cytochrome C）蛋白水平,JC-1法測定線粒體膜電位。結果攜帶PTEN siRNA的慢病毒載體感染后的星形膠質(zhì)細胞中PTEN表達水平降低。缺氧復氧處理后的星形膠質(zhì)細胞活力降低,細胞LDH漏出率升高,細胞凋亡率升高,細胞G1期比例升高,Cdk4蛋白水平降低,p21蛋白水平升高,胞質(zhì)中Cytochrome C蛋白增多,線粒體膜電位降低。敲低PTEN可以提高缺氧復氧條件下星形膠質(zhì)細胞活力,降低細胞LDH漏出率,減少G1期細胞比例,降低細胞凋亡率,促進細胞表達Cdk4蛋白,減少... 

【文章來源】：中國實用神經(jīng)疾病雜志. 2019,22(23)

【文章頁數(shù)】：10 頁

【部分圖文】：

Western blot檢測攜帶PTEN siRNA的慢病毒載體對缺氧復氧條件下星形膠質(zhì)細胞中PTEN蛋白水平影響

表2 敲低PTEN對缺氧復氧條件下星形膠質(zhì)細胞存活率和LDH漏出率影響 ( x ˉ ±s,%) Table 2 Effect of knockdown of PTEN on astrocyte survival rate and LDH leakage rate under hypoxia-reoxygenation conditions ( x ˉ ±s,%) 組別 存活率 LDH漏出率 Control 100.00 26.11±2.78 H/R 68.25±4.15& 59.42±2.47& si-NC+H/R 65.89±8.24 60.84±6.59 si-PTEN+H/R 79.22±5.11* 36.44±4.17* F值 26.134 47.529 P值 0.000 0.000 注:與Control比較,&P<0.05;與si-NC+H/R和H/R比較,*P<0.05圖3 流式細胞術測定敲低PTEN對缺氧復氧條件下星形膠質(zhì)細胞凋亡影響

圖2 Western blot檢測敲低PTEN對缺氧復氧條件下星形膠質(zhì)細胞中周期相關蛋白Cdk4、p21表達影響表3 敲低PTEN對缺氧復氧條件下星形膠質(zhì)細胞周期分布及Cdk4、p21蛋白水平影響 ( x ˉ ±s) Table 3 Effect of knockdown of PTEN on astrocyte cell cycle distribution and Cdk4,p21 protein levels under hypoxia-reoxygenation ( x ˉ ±s) 組別 G1(%) S(%) G2/M(%) p21 Cdk4 Control 60.14±5.17 27.45±2.24 12.41±1.05 0.26±0.02 0.68±0.06 H/R 78.26±4.23& 14.85±1.18& 6.89±0.78& 0.85±0.09& 0.41±0.03& si-NC+H/R 79.14±5.32 15.69±1.54 5.17±1.11 0.87±0.07 0.40±0.05 si-PTEN+H/R 68.76±2.56* 22.86±2.64* 8.39±1.47* 0.36±0.05* 0.51±0.02* F值 12.109 27.579 22.458 77.409 27.351 P值 0.002 0.000 0.000 0.000 0.000 注:與Control比較,&P<0.05;與si-NC+H/R和H/R比較,*P<0.05


本文編號：3295983