目的:分別用原核和真核細(xì)胞穩(wěn)定表達(dá)水痘-帶狀皰疹病毒（Varicella-zoster virus,VZV）糖蛋白E（glycoprotein E,g E）的基因胞外域,對融合蛋白進(jìn)行特異性鑒定和免疫反應(yīng)性分析,將這兩種融合蛋白分別免疫新西蘭家兔,制備兔抗VZV g E多克隆抗體;應(yīng)用融合蛋白作為抗原建立檢測VZV特異性抗體的血清學(xué)試驗,開展對VZV感染的流行病學(xué)調(diào)查,以評價VZV疫苗的免疫效果,為易感人群VZV感染的診斷和治療以及水痘預(yù)防措施的制定提供重要的實驗依據(jù),并為研制安全性更高的VZV g E亞單位疫苗奠定基礎(chǔ)。方法:從臨床采集帶狀皰疹患者的皮膚囊泡液接種至單層人胚胎成纖維細(xì)胞（human embryo fibroblast,HF）,進(jìn)行病毒分離;對分離的病毒株進(jìn)行特征性細(xì)胞病變效應(yīng)（Cytopathic effect,CPE）,間接免疫熒光和DNA測序鑒定。將確認(rèn)的VZV臨床分離株體外培養(yǎng),PCR擴增VZV g E基因胞外域片段,分別構(gòu)建原核表達(dá)質(zhì)粒g E-p ET-32a（+）和真核表達(dá)質(zhì)粒g E-p CDNA3.1/myc-His（-）,測序后將原核質(zhì)粒轉(zhuǎn)化至E.col... 

【文章來源】：安徽醫(yī)科大學(xué)安徽省

【文章頁數(shù)】：61 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

HZ患者皮膚囊泡液接種至HF細(xì)胞后出現(xiàn)CPE結(jié)果(×200).A：正常HF細(xì)胞；B：VZV感

安徽醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文原核重組質(zhì)粒 gE-pET-32a(+)和真核重組質(zhì)粒 gE-pCDNA3.1/myc-His(-鑒定PCR 擴增的 gE 基因的產(chǎn)物和重組質(zhì)粒 gE-pET-32a(+)被雙酶切后的產(chǎn)物凝膠電泳，均可見 1617 bp 的目的條帶。圖 3、4。該產(chǎn)物經(jīng) DNA 測序后T 法與 GenBank 數(shù)據(jù)庫比對，其序列與 VZV Dumas 標(biāo)準(zhǔn)株基因組 DNA 的應(yīng)序列符合率為 100%。圖 5。

重組質(zhì)粒 gE-pCDNA3.1/myc-His(-)的構(gòu)建與酶切鑒定. A：gE 基因胞外域重組質(zhì)粒單、雙酶切鑒定。 M：Marker；1: 目的基因片段；2: 以 ddH2O照；3: 重組質(zhì)粒；4: 重組質(zhì)粒經(jīng) Xhol I 酶切；5: 重組質(zhì)粒經(jīng) HandIII 酶雙酶切。e construction of the gE-pCDNA3.1/myc-His(-) plasmid. A: PCR amplificalar domain; B: Identification of recombinant plasmid with restriction enzymerker; 1:gE extracellular domain gene product; 2: PCR negative cA3.1/myc-His(-) plasmid; 4: Xhol I enzyme digestion; 5: HandIII enzymeand HandIII double enzyme digestion.

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]水痘-帶狀皰疹病毒疫苗的評價與研究進(jìn)展[J]. 伊興旭,甘霖,陳敬賢,王明麗.  微生物與感染. 2014(04)
[2]應(yīng)用膜抗原熒光抗體試驗檢測人群水痘-帶狀皰疹病毒血清抗體陽性率[J]. 劉靜靜,王明麗,甘霖,廖偉嬌,陳敬賢.  中華流行病學(xué)雜志. 2009 (04)
[3]水痘-帶狀皰疹病毒臨床分離株基因型別分析以及與Oka疫苗株的區(qū)別[J]. 劉靜靜,王明麗,甘霖,楊森,陳敬賢.  中華微生物學(xué)和免疫學(xué)雜志. 2009 (03)
[4]水痘減毒活疫苗的研究進(jìn)展[J]. 甘霖,王明麗,陳敬賢.  微生物與感染. 2009(01)
[5]水痘-帶狀皰疹免疫球蛋白研究進(jìn)展[J]. 王敏力,沈琦.  中國生物制品學(xué)雜志. 2007(09)



本文編號：3292008