目的探索人羊膜間充質(zhì)干細胞來源外泌體（hAMSC-Exos）的分離、純化與鑒定方法,為外泌體的生物學功能研究奠定基礎。方法由廢棄的羊膜提取間充質(zhì)干細胞;采取改良超速離心法分離、純化培養(yǎng)液上清中的hAMSC-Exos;透射電鏡觀察、納米粒子跟蹤分析技術（NTA）、Western blot和流式細胞術用于hAMSC-Exos的鑒定外泌體。結(jié)果成功用改良超速離心法分離出hAMSC-Exos,透射電鏡（TEM）下觀察呈中間凹陷的茶杯樣結(jié)構;NTA結(jié)果顯示樣品直徑符合外泌體直徑大小;Western blot和流式細胞術證實外泌體表面特異性蛋白CD9、CD63、CD81表達陽性。結(jié)論建立了hAMSC-Exos的提取純化及鑒定方法,為它后續(xù)的研究提供依據(jù)。 

【文章來源】：解剖科學進展. 2020,26(02)

【文章頁數(shù)】：4 頁

【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 標本與細胞
    1.2 hAMSCs的分離、培養(yǎng)
    1.3 hAMSCs流式細胞鑒定
    1.4 hAMSC-Exos的分離與純化
    1.5 透射電子顯微鏡鑒定hAMSCs-Ex
    1.6 NTA鑒定hAMSCs-Ex
    1.7 Western Blot檢測h AMSCs-Ex表面標記CD9、CD63、CD81
    1.8 流式細胞儀鑒定hAMSCs-Ex表面標記
2 結(jié)果
    2.1 hAMSCs細胞的分離和培養(yǎng)
    2.2 流式細胞術鑒定hAMSCs
    2.3 透射電子顯微鏡鑒定hAMSC-Exos
    2.4 NTA鑒定hAMSC-Exos
    2.5 Western Blot檢測hAMSCs-Ex表面標記蛋白
    2.6 流式細胞術鑒定hAMSCs-Ex表面標記蛋白
3 討論


【參考文獻】：
期刊論文
[1]BMSCs-exo對紫外線誘導成纖維細胞光老化的保護作用[J]. 趙翡,朱華,馬海英,盧曉梅,馬玲,于艷秋.  解剖科學進展. 2019(05)
[2]間充質(zhì)干細胞對慢性間質(zhì)性腎炎大鼠轉(zhuǎn)分化相關細胞因子表達的影響[J]. 李維,李優(yōu),姜紅.  解剖科學進展. 2018(06)
[3]Exosome and Exosomal MicroRNA: Trafficking, Sorting, and Function[J]. Jian Zhang,Sha Li,Lu Li,Meng Li,Chongye Guo,Jun Yao,Shuangli Mi.  Genomics,Proteomics & Bioinformatics. 2015(01)



本文編號：3241627