目的:探討雷諾丁受體1（RYR1）表達下調對小鼠成肌細胞C2C12中線粒體的影響及其發(fā)生機制。方法:采用小干擾RNA（siRNA）敲減C2C12細胞的RYR1表達,應用透射電鏡對線粒體進行體視學分析,觀察細胞內線粒體數(shù)目和形態(tài)學的改變,應用real-time PCR和Western blot方法檢測線粒體融合蛋白2（Mfn2）、過氧化物酶體增殖物激活受體γ輔激活因子1α（PGC-1α）和細胞外信號調節(jié)激酶1/2（ERK1/2）的mRNA及蛋白水平的改變。結果:RYR1敲減（KD）組RYR1的mRNA水平顯著降低（P<0.01）。陰性對照（NC）組及空白對照（BC）組線粒體維持長管狀結構,而KD組線粒體呈碎片化改變。與NC組相比,KD組的線粒體數(shù)目呈增加趨勢（差異無統(tǒng)計學顯著性）,線粒體面積和周長顯著減少（P<0.05）。KD組的Mfn2在mRNA和蛋白水平均顯著降低（P<0.01）,而PGC-1α在mRNA水平顯著降低（P<0.01）,在蛋白水平未見明顯差異;ERK1/2在mRNA水平和蛋白水平的差異均無統(tǒng)計學顯著性,也未檢測到磷酸化ERK1/2的水平變化。結論... 

【文章來源】：中國病理生理雜志. 2019,35(12)北大核心CSCD

【文章頁數(shù)】：7 頁

【文章目錄】：
材 料 和 方 法
    1 主要實驗材料、儀器和試劑
    2 方法
        2.1 siRNA設計合成
        2.2 實驗分組
        2.3 C2C12細胞的培養(yǎng)方法
        2.4 siRNA轉染
        2.5 C2C12細胞的電鏡標本制備和圖片攝取
        2.6 線粒體體視學分析
        2.7 Real-time PCR檢測C2C12細胞內RYR1、PGC-1α、Mfn2、ERK1/2和GAPDH的mRNA表達
        2.8 Western blot法檢測PGC-1α、Mfn2、ERK1/2、p-ERK1/2和GAPDH的蛋白水平
    3 統(tǒng)計學處理
結 果
    1 siRNA轉染后RYR1 mRNA表達的改變
    2 C2C12細胞內線粒體超微結構的變化
    3 PGC-1α、Mfn2和ERK1/2的mRNA表達水平的變化
    4 PGC-1α、Mfn2、ERK1/2和p-ERK1/2蛋白水平的變化
討 論



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