流感病毒的跨種傳播是一個(gè)包含病毒和宿主因子之間大量相互作用的復(fù)雜過程。除了轉(zhuǎn)換細(xì)胞表面受體結(jié)合特異性,禽流感病毒還要克服核膜形成的另一個(gè)重要屏障–核輸入機(jī)制來進(jìn)入細(xì)胞核進(jìn)行有效轉(zhuǎn)錄和復(fù)制。本文主要研究人源importin-α7對(duì)不同來源、不同亞型流感病毒生長的影響。根據(jù)CRISPR/Cas9靶點(diǎn)設(shè)計(jì)原則分別在人importin-α7功能域第5和第6個(gè)外顯子設(shè)計(jì)一對(duì)小向?qū)NA（sgRNAs）并克隆入pX459載體,重組質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染A549細(xì)胞,構(gòu)建A549-importin-α7-KO細(xì)胞系;再分別用不同來源（人源、豬源和禽源）、不同亞型的甲型流感病毒與乙型流感病毒感染A549-importin-α7-KO細(xì)胞和野生型A549細(xì)胞,研究importin-α7對(duì)流感病毒生長特性的影響。經(jīng)測(cè)序和Western blotting驗(yàn)證,成功構(gòu)建A549-importin-α7-KO細(xì)胞系;激光共聚焦觀察結(jié)果顯示,importin-α7敲除后vRNPs入核減少;同時(shí)Importin-α7敲除后流感病毒的生長均受到抑制,其中importin-α7對(duì)人流感病毒A/California/04/2009（... 

【文章來源】：病毒學(xué)報(bào). 2017,33(06)北大核心

【文章頁數(shù)】：7 頁

【文章目錄】：
材料與方法
    1質(zhì)粒、病毒及細(xì)胞
    2主要試劑
    3 sgRNA oligo的設(shè)計(jì)及合成
    4重組質(zhì)粒pX459-importin-α7-sgRNAs的構(gòu)建及鑒定
    5細(xì)胞轉(zhuǎn)染及importin-α7基因敲除單克隆細(xì)胞系的篩選
    6單克隆細(xì)胞系測(cè)序鑒定
    7 Western blotting檢測(cè)細(xì)胞系中importin-α7蛋白的表達(dá)
    8 Importin-α7敲除對(duì)PR8-Luc復(fù)制的影響
    9 Importin-α7敲除對(duì)流感病毒vRNPs入核的影響
    10 Importin-α7敲除對(duì)不同來源、不同亞型流感病毒生長的影響
結(jié)果
    1 A549-importin-α7-KO細(xì)胞系的構(gòu)建和驗(yàn)證
    2 Importin-α7敲除對(duì)PR8-Luc復(fù)制的影響
    3 Importin-α7敲除對(duì)流感病毒vRNPs入核的影響
    4 Importin-α7敲除對(duì)不同來源和不同亞型流感病毒生長的影響
討論



本文編號(hào)：3082758