目的構(gòu)建并鑒定巨噬細胞條件性Atg5基因敲除小鼠,為研究巨噬細胞自噬在腎臟疾病發(fā)病機制中的作用提供動物模型。方法將引進LysM-Cre小鼠與Atg5^flox/+小鼠進行雜交、Atg5^flox/+小鼠自交,分別獲得基因型為Atg5^flox/+Cre^+/-和Atg5^flox/flox Cre^-/-的子代小鼠;將上述兩種基因型的子代小鼠雜交,得到巨噬細胞條件性Atg5基因敲除小鼠(Atg5 ^flox/floxCre^+/-,Atg5^-/-)和對照小鼠(Atg5 ^flox/floxCre^-/-,Atg5^+/+)。提取小鼠鼠尾組織基因組DNA,經(jīng)PCR擴增及瓊脂糖凝膠電泳后,在DNA水平判斷小鼠基因型;提取小鼠骨髓來源巨噬細胞RNA和蛋白,利用基因測序和Western blot技術(shù)檢驗Atg5基因的敲除效果。結(jié)果成功建立巨噬細胞條件性At... 

【文章來源】：中國實驗動物學(xué)報. 2019,27(06)北大核心

【文章頁數(shù)】：6 頁

【部分圖文】：

小鼠繁殖方案

部分小鼠基因型PCR鑒定

使用雷帕霉素(Rap)誘導(dǎo)自噬后,Atg5-/-小鼠巨噬細胞自噬不能恢復(fù)到正�；A(chǔ)水平,提示Atg5-/-小鼠巨噬細胞自噬缺陷;綜上,巨噬細胞條件性Atg5基因敲除小鼠構(gòu)建成功。3 討論

【參考文獻】：
期刊論文
[1]維生素D受體基因敲除小鼠品系的建立與鑒定[J]. 趙家榮,劉歡,張濤,王令,路宏朝,杜偉立.  中國實驗動物學(xué)報. 2018(06)
[2]Caveolin-1基因敲除小鼠子代基因型的鑒定及繁育方法[J]. 周勝強,羅東,黃素芬,易健,劉柏炎.  中國實驗動物學(xué)報. 2016(03)



本文編號：3026692