研究背景及目的:Akt是一種絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶,在介導生長因子信號中發(fā)揮重要作用。Akt調控細胞周期進程,在細胞存活、生長與增殖、糖代謝以及染色體穩(wěn)定性等生物過程中發(fā)揮重要功能。眾多研究已經(jīng)表明,Akt與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展密切相關,是介導腫瘤代謝Warburg效應的重要分子,是一種重要的癌基因。因此,研究Akt蛋白激酶的分子調控機制具有重要的理論價值和潛在的臨床應用價值。盡管已有大量文獻報道G1-S期Akt相關信號通路的調控機制,但G2/M期Akt的分子調控機制尚不清楚。APC/C泛素E3連接酶作為G2/M期細胞周期演進的最主要調控分子復合體,通過Cdc20和Cdh1這兩個激活分子（Activator）,分別識別底物分子的D-box、KEN-box序列,對底物分子進行泛素化修飾,致使蛋白酶體依賴性的底物分子降解,促成細胞周期演進。本研究旨在揭示G2/M期Akt活性變化,探討APC/C對Akt活性的調控作用及其分子機制。研究方法:（1）用Nocodazole（諾考達唑）對細胞進行同步化處理,使細胞周期阻滯于G2/M期,采用流式細胞術（Flow Cytometry,FCM）加以驗證。（2... 

【文章來源】：江蘇大學江蘇省

【文章頁數(shù)】：69 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
第一章 緒論
    1.1 Akt的研究背景
        1.1.1 Akt的結構
        1.1.2 Akt的活化與相關信號通路
        1.1.3 Akt的功能
        1.1.4 Akt與腫瘤的關系
    1.2 細胞周期的研究背景
        1.2.1 細胞周期的分期
        1.2.2 細胞周期的調控
        1.2.3 細胞周期的同步化
    1.3 APC/C的研究背景
        1.3.1 APC/C的結構
        1.3.2 APC/C介導的泛素-蛋白酶體降解途徑
        1.3.3 APC/C主要的輔助因子和靶蛋白
        1.3.4 APC/C對細胞周期的調控及其與腫瘤的關系
第二章 研究目的、方法、內容和研究意義
    2.1 研究目的
    2.2 研究方法
    2.3 研究內容
        2.3.1 G2/M期Akt活性變化及其與Cdh1、Cdc20表達水平之間的關系研究
        2.3.2 G2/M期Akt活性調控的分子機制研究
        2.3.3 G2-M期Akt活性下降對細胞凋亡的影響
    2.4 研究意義
第三章 G2/M期Akt活性的變化以及APC/C調控Akt活性的機制
    3.1 實驗儀器和材料
        3.1.1 主要的實驗儀器
        3.1.2 材料
    3.2 實驗方法
        3.2.1 細胞培養(yǎng)
        3.2.2 細胞同步化處理
        3.2.3 同步化細胞蛋白提取和蛋白相對定量
        3.2.4 免疫印跡法（immunoblot）
        3.2.5 質粒的制備
        3.2.6 轉染
        3.2.7 流式細胞術（FCM）
            3.2.7.1 流式細胞術檢測細胞周期
            3.2.7.2 流式細胞術檢測細胞凋亡
    3.3 實驗結果
        3.3.1 細胞同步化后細胞形態(tài)及細胞周期的變化
        3.3.2 G2/M期Akt活性變化及其與Cdh1、Cdc20表達水平之間的關系研究
        3.3.3 G2/M期Akt活性調控的分子機制研究
        3.3.4 Akt上游調控分子在細胞周期中的變化研究
        3.3.5 G2/M期AKT活性的抑制可促進細胞凋亡
    3.4 討論
第四章 結論及展望
    4.1 主要結論
    4.2 展望
參考文獻
綜述：促后期復合物（APC/C）對有絲分裂期（M期）的調控作用
    參考文獻
致謝
攻讀碩士學位期間發(fā)表的學術論文及相關科研成果


【參考文獻】：
期刊論文
[1]PI3K/Akt抑制劑對肺癌細胞化療藥物敏感性的影響[J]. 余祖濱,白莉,張國強,閔家新,肖穎彬.  重慶醫(yī)學. 2009(11)



本文編號：3017823