本文關鍵詞：以β-葡聚糖為佐劑的腦膜炎多糖結合疫苗制備及其免疫原性研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：流行性腦脊髓膜炎是由腦膜炎奈瑟氏球菌引起的化膿性腦膜炎,此病分布范圍廣,致死率高,具有耐藥性。但是單純的腦膜炎雙球菌莢膜多糖(簡稱CPS)屬胸腺非依賴性抗原不能誘導免疫記憶,且只適用于成人,不適合常規(guī)接種兩歲以下兒童。將載體蛋白與CPS共價結合可使其轉化成T細胞依賴性抗原,從而刺激合成T細胞依賴性抗體,不僅可以產(chǎn)生免疫記憶,還能提高免疫球蛋白Ig G的抗體比例及抗體親和力的成熟,這種多糖結合疫苗可適用于成人,也適用于嬰幼兒。。然而,目前這些結合疫苗均存在接種劑量較大、免疫效率不高的缺點,因此,亟待研發(fā)效率更高和免疫原性更強的新型結合疫苗。盡管?-葡聚糖佐劑已經(jīng)被用來提高抗原的免疫原性,但是將佐劑與結合疫苗化學偶聯(lián)或物理混合的研究幾乎沒有被研究。?-葡聚糖可以促進細胞免疫和體液免疫,通過與特殊受體如CR3和Dectin-1等結合,可以激活巨噬細胞,影響細胞因子的釋放。本次研究中,活化的CPS與破傷風類毒素(TT)化學偶聯(lián)成CPS-TT,?-葡聚糖與高碘酸鈉氧化羥基被氧化成醛基,再將?-葡聚糖偶聯(lián)CPS-TT生成CPS-TT-G。將?-葡聚糖與CPS-TT物理混合得到CPS-TT/G1和CPS-TT/G2。使用紅外色譜,核磁共振,動態(tài)光散射儀,高效液相色譜分析等對產(chǎn)物進行結構分析。將CPS,CPS-TT,CPS-TT/Al,CPS-TT-G,CPS-TT/G1和CPS-TT/G2免疫小鼠后運用ELISA方法測定小鼠血清中的抗體滴度,研究發(fā)現(xiàn)CPS產(chǎn)生的CPS特異性的Ig M抗體滴度遠遠低于CPS-TT和CPS-TT-G的抗體滴度,這表明將TT偶聯(lián)到CPS上可大大增加CPS特異性的Ig M抗體滴度,同時注射第三針CPS-TT-G產(chǎn)生的CPS特異性Ig G/Ig M比率遠遠高于CPS-TT。這說明加入?-葡聚糖使抗體的合成更多地從Ig M轉為合成Ig G。將CPS-TT-G免疫小鼠21d后得到的CPS特異性Ig G抗體滴度是CPS-TT的8.2倍。這可能是將?-葡聚糖與CPS-TT化學偶聯(lián)可保證二者同時到達抗原遞呈細胞。然而,將?-葡聚糖與CPS-TT物理混合后,CPS特異性Ig G抗體滴度降低了,這可能是因為將?-葡聚糖與CPS-TT物理混合后,?-葡聚糖會優(yōu)先到達抗原遞呈細胞,占據(jù)B細胞結合位點。這充分說明,將?-葡聚糖化學偶聯(lián)是提高結合疫苗CPS特異性抗體滴度的一種很好的策略。
【關鍵詞】：腦膜炎球菌莢膜多糖 佐劑 β-葡聚糖 免疫原性
【學位授予單位】：南華大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R392-33
【目錄】：

• 摘要4-6
• Abstract6-12
• 第1章 緒論12-24
• 1.1 生物制品12-13
• 1.1.1 生物制品的定義12
• 1.1.2 從疫苗生產(chǎn)看生物制品的發(fā)展概況12-13
• 1.2 腦膜炎雙球菌疫苗13-16
• 1.2.1 流行性腦脊髓膜炎介紹13-14
• 1.2.2 流行性腦膜炎致病因素及分布14-15
• 1.2.3 腦脊髓球菌莢膜多糖疫苗發(fā)展現(xiàn)狀15-16
• 1.3 腦膜炎球菌疫苗的 β-葡聚糖修飾16-19
• 1.3.1 β-葡聚糖的基本結構17
• 1.3.2 β-葡聚糖的高級結構17-18
• 1.3.3 β-葡聚糖的免疫調(diào)節(jié)作用18-19
• 1.3.4 β-葡聚糖的免疫調(diào)節(jié)作用機制19
• 1.4 β-葡聚糖修飾產(chǎn)物的分離純化技術19-20
• 1.5 β-葡聚糖修飾產(chǎn)物的常用表征方法20-22
• 1.5.1 電泳法20
• 1.5.2 圓二色光譜（CD）和熒光光譜分析20-21
• 1.5.3 核磁共振波譜法(NMR)21
• 1.5.4 傅里葉變換紅外光譜法。21
• 1.5.5 高效液相色譜法（HPLC）21
• 1.5.6 動態(tài)光散射（DLS）21-22
• 1.6 佐劑修飾產(chǎn)物的免疫原性22
• 1.6.1 酶聯(lián)免疫吸附法（簡稱ELISA）的原理22
• 1.6.2 酶聯(lián)免疫吸附法的種類22
• 1.7 論文的立題思想22-24
• 第2章 β-葡聚糖修飾腦膜炎多糖結合疫苗的研究24-40
• 2.1 引言24
• 2.2 試劑與儀器24-26
• 2.3 實驗方法26-27
• 2.3.1 腦膜炎球菌莢膜多糖（簡稱CPS）活化26
• 2.3.2 CPS-TT的制備與純化26
• 2.3.3 葡聚糖（簡稱Glu）的氧化26
• 2.3.4 CPS-TT-G的制備與純化26-27
• 2.4 結構分析和含量測定方法27-33
• 2.4.1 SDS-PAGE電泳分析27-30
• 2.4.2 蛋白濃度測定30-31
• 2.4.3 結合物中結合和游離Y糖含量測定31-32
• 2.4.4 動態(tài)光散射32
• 2.4.5 尺寸排阻色譜分析32-33
• 2.4.6 ~1H核磁共振33
• 2.4.7 紅外光譜分析33
• 2.5 實驗結果及討論33-38
• 2.5.1 修飾產(chǎn)物的電泳分析33-34
• 2.5.2 修飾產(chǎn)物的SEC分析和定量分析34-36
• 2.5.3 修飾產(chǎn)物的結構表征36-38
• 2.6 本章小結38-40
• 第3章 修飾產(chǎn)物免疫原性的研究40-53
• 3.1 修飾產(chǎn)物的動物免疫40
• 3.2 動物血清的抗體滴度測定40-42
• 3.2.1 ELISA法包被底物的配制40-41
• 3.2.2 ELISA法抗體滴度的測定過程41-42
• 3.3 抗體特異性的測定42
• 3.4 抗體親和力的測定42
• 3.5 統(tǒng)計分析42-43
• 3.6 實驗結果與討論43-51
• 3.6.1 化學偶聯(lián)與物理混合的特異性抗體43-49
• 3.6.2 競爭性ELISA研究49
• 3.6.3 抗體親和力測試49-51
• 3.7 本章小結51-53
• 第4章 結論53-55
• 參考文獻55-62
• 作者攻讀學位期間的科研成果62-63
• 致謝63

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中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 曹世儉,李敬軍;確定抗體最佳滴度的簡便方法[J];臨床與實驗病理學雜志;1998年02期

2 韓世杰,張建;人群新城疫病毒抗體水平的調(diào)查[J];中國人獸共患病雜志;1986年05期

3 程秀峰,mailserv.stu.edu.cn,曾慶馀,mailserv.stu.edu.cn,陳肅標,mailserv.stu.edu.cn,謝素和,mailserv.stu.edu.cn,許杰州,mailserv.stu.edu.cn,肖征宇,mailserv.stu.edu.cn,黃少弼,mailserv.stu.edu.cn;抗Sa抗體的檢測及其臨床意義[J];中華風濕病學雜志;2000年04期

4 王秀萍,王曉琴,剛華,張衡謙;大連市正常人群乙腦抗體水平檢測報告[J];中國衛(wèi)生檢驗雜志;2004年02期

5 馬晶;郭秀嬋;曾毅;;HIV抗體檢測技術研究進展[J];病毒學報;2006年02期

6 陳煜;高宏偉;鄧明俊;吳振興;張彥明;肖西志;;赫氏埃希菌抗體的體外特異性抑菌實驗[J];中國農(nóng)學通報;2011年27期

7 邵宗鴻;王振義;楊天楹;;因子Ⅷ抗體研究的進展[J];臨床血液學雜志;1989年02期

8 李春元;;500名護士接種乙型肝炎疫苗的結果[J];國外醫(yī)學.預防.診斷.治療用生物制品分冊;1989年01期

9 蘭小鵬;抗雙鏈DNA抗體研究的若干進展[J];國外醫(yī)學(免疫學分冊);1994年06期

10 劉紅;脫氧核糖核酸抗體的研究進展[J];腎臟病與透析腎移植雜志;1998年05期

中國重要會議論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 胡清海;張知良;黃建芳;趙寶華;;應用間接免疫熒光抗體技術檢測雞傳染性貧血病毒的抗體[A];中國畜牧獸醫(yī)學會禽病學會分會第十次學術研討會論文集[C];2000年

2 張立華;劉玉梅;蒼楓;孫艷琪;黃凱;高艷華;巴特;左小平;泰鵬;魏華;王麗君;張燕紅;張龍;魏學峰;盧永干;;牛口蹄疫O型病毒146S抗原含量與抗體滴度和保護相關關系的研究[A];中國畜牧獸醫(yī)學會2008年學術年會暨第六屆全國畜牧獸醫(yī)青年科技工作者學術研討會論文集[C];2008年

3 湯海平;曾中華;林映升;林躍華;;肉用種鴿高致病性禽流感滅活苗免疫效果試驗[A];2010年福建省畜牧獸醫(yī)學術年會論文集[C];2010年

4 朱智勇;;推薦檢測SARS早期抗體的一種新方法[A];浙江省免疫學會第五次學術研討會論文匯編[C];2004年

5 王靜霞;程顯芬;崔小岱;王洛平;;肺支總抗體與特異性抗體IgM聯(lián)合檢測對兒科臨床意義探討[A];中華醫(yī)學會第八次全國檢驗醫(yī)學學術會議暨中華醫(yī)學會檢驗分會成立30周年慶典大會資料匯編[C];2009年

6 韓威;李慧芳;朱云芬;束婧婷;張學余;陳寬維;;Mx基因S631N多態(tài)位點與白耳雞免疫性狀的關聯(lián)分析[A];中國家禽科學研究進展——第十四次全國家禽科學學術討論會論文集[C];2009年

7 李長貴;Caroline Gravel;徐康維;王劍鋒;邵明;劉書珍;黎旭光;王軍志;;抗流感病毒神經(jīng)氨酸酶通用抗體的制備及鑒定[A];2010年中國藥學大會暨第十屆中國藥師周論文集[C];2010年

8 趙增陽;習欠云;張志岐;王瑞曉;江青艷;張永亮;;豬SSTR5胞外區(qū)Ⅱ環(huán)多克隆抗體的制備及其生物活性檢測[A];全國動物生理生化第十一次學術交流會論文摘要匯編[C];2010年

9 劉玉梅;郭樹華;魏學峰;陳九連;黃凱;蒼楓;董俊余;張立華;孫艷琪;高換河;王偉峰;盧永干;;�？谔阋逜sia-Ⅰ型滅活疫苗LPB-E抗體滴度與免疫保護相關性研究[A];中國畜牧獸醫(yī)學會2008年學術年會暨第六屆全國畜牧獸醫(yī)青年科技工作者學術研討會論文集[C];2008年

10 丁家波;楊宏軍;康孟佼;程君生;毛開榮;蔣玉文;;布魯氏菌在豚鼠和奶牛體內(nèi)誘導的抗體水平和變態(tài)反應強度相關性研究[A];中國畜牧獸醫(yī)學會獸醫(yī)公共衛(wèi)生學分會第二次學術研討會論文集[C];2010年

中國重要報紙全文數(shù)據(jù)庫 前4條

1 山東省農(nóng)科院 王成立 研究員;洞察動物健康水平的“秘密武器”[N];中國畜牧獸醫(yī)報;2006年

2 北京華都集團良種基地技術部 李雪峰 劉全來;養(yǎng)雞場如何做好新城疫監(jiān)測工作[N];中國畜牧報;2003年

3 山東省畜牧獸醫(yī)總站 陳靜 吳巧玲 姜秀云;洞察動物抗體水平的“顯微鏡”[N];中國畜牧獸醫(yī)報;2006年

4 山東省農(nóng)科院家禽研究所 秦卓明 何葉峰 成武縣畜牧局 宋憲軍;強化生物安全體系建設[N];中國畜牧報;2002年

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1 朱冬;IVIg與HLA-E單克隆抗體TFL007抑制HLA抗體分泌的研究[D];復旦大學;2014年

2 趙文忠;小鼠TLR-2的克隆、表達及其抗體的生物活性研究[D];第一軍醫(yī)大學;2004年

3 邱茂鋒;SARS-CoV蛋白質(zhì)的抗體譜及雙抗原夾心ELISA檢測抗體方法的研究[D];中國人民解放軍軍事醫(yī)學科學院;2004年

4 康曉平;抗SARS病毒人源Fab抗體的制備研究[D];中國人民解放軍軍事醫(yī)學科學院;2005年

5 郭生玉;抗人類肺動脈內(nèi)皮細胞自身抗體的檢出及肺血管內(nèi)皮損傷機制的研究[D];中國醫(yī)科大學;2007年

6 劉忠保;血管緊張素Ⅱ AT_1受體的抗體對大鼠心血管活動的影響[D];山西醫(yī)科大學;2005年

7 喬春霞;抗IgE抗體的設計與研制[D];中國人民解放軍軍事醫(yī)學科學院;2008年

8 趙鵬;豬繁殖與呼吸綜合征病毒在抗體選擇壓下的變異[D];山東農(nóng)業(yè)大學;2010年

9 陳功;神經(jīng)突觸前膜胞內(nèi)蛋白（Munc18）抗體慢性點燃致癇大鼠及其致癇機制的研究[D];復旦大學;2004年

10 李鍇男;核呼吸因子基因的克隆表達及單克隆、多克隆抗體的制備[D];第四軍醫(yī)大學;2008年

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1 喬衛(wèi)林;以β-葡聚糖為佐劑的腦膜炎多糖結合疫苗制備及其免疫原性研究[D];南華大學;2015年

2 李靖;第二抗體對免疫組化染色的影響[D];河北醫(yī)科大學;2004年

3 崔理立;β-樣淀粉肽1-9（Aβ1-9）重復片段的表達純化及其誘導抗體的功能研究[D];吉林大學;2009年

4 趙萬樂;抗奶牛Y精子蛋黃抗體的提取及其對奶牛精子作用效果的研究[D];甘肅農(nóng)業(yè)大學;2013年

5 來利紅;實驗感染小鼠肉汁中抗旋毛蟲抗體水平的觀察[D];鄭州大學;2006年

6 田剛;甲狀腺素抗體IgY制備和放免中的應用[D];天津醫(yī)科大學;2002年

7 尚世彤;人類端粒酶逆轉錄酶基因的原核表達及其表達產(chǎn)物抗體的制備[D];天津醫(yī)科大學;2002年

8 盛劍俊;抗齲齒蛋黃抗體的制備及其研究[D];江南大學;2004年

9 黃雪媚;β-淀粉樣蛋白的表達、純化及其誘導抗體的功能研究[D];吉林大學;2008年

10 李彩波;雞卵被動抗體傳遞吸收規(guī)律的研究[D];吉林農(nóng)業(yè)大學;2008年

  本文關鍵詞：以β-葡聚糖為佐劑的腦膜炎多糖結合疫苗制備及其免疫原性研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：299416