本文關(guān)鍵詞：體外培養(yǎng)星形膠質(zhì)細(xì)胞α7尼古丁型乙酰膽堿能受體調(diào)控β-淀粉樣蛋白聚集的作用，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:研究激活星形膠質(zhì)細(xì)胞內(nèi)的α7尼古丁乙酰膽堿能受體(nicotinic acetylcholine receptor,nAChR)后對調(diào)控β-淀粉樣蛋白(β-amyloid peptide,Aβ)聚集的作用。方法:分離新生大鼠大腦皮質(zhì),培養(yǎng)原代星形膠質(zhì)細(xì)胞并純化、傳代,使用細(xì)胞免疫熒光的方法鑒定細(xì)胞及純度;體外制備Aβ寡聚體;將培養(yǎng)細(xì)胞分為對照組、激動劑組、拮抗劑+激動劑組以及Aβ組、激動劑+Aβ組、拮抗劑+激動劑+Aβ組。激動劑有尼古丁、PNU、s24795,拮抗劑為甲基牛扁亭(methyllycaconitine,MLA)。用蛋白印跡法(Western blotting)和逆轉(zhuǎn)錄PCR(reverse transcription,PCR)法檢測正常星形膠質(zhì)細(xì)胞內(nèi)nAChR不同亞單位的表達(dá);蛋白印跡法和凝膠銀染方法鑒定Aβ寡聚體聚集情況;用CCK-8方法測定星形膠質(zhì)細(xì)胞的存活率;使用蛋白印跡法檢測加入激動劑后α7 nAChR的表達(dá)以及Aβ蛋白是否降解。結(jié)果:采用免疫熒光法鑒定所培養(yǎng)的細(xì)胞,結(jié)果顯示星形膠質(zhì)細(xì)胞占所有細(xì)胞的95%以上。除β3外,星形膠質(zhì)細(xì)胞中α2、α3、α4、α7及β2 nAChR亞單位在蛋白及mRNA水平均有表達(dá)。體外制備的Aβ除了含少量的未聚集的單體(4 kDa)外,主要以二聚體、三聚體、九聚體等不同聚集形式的寡聚體存在;CCK-8方法顯示Aβ寡聚體對星形膠質(zhì)細(xì)胞有明顯的神經(jīng)毒性作用,并呈現(xiàn)劑量-效應(yīng)關(guān)系。檢測α7 nAChR蛋白表達(dá)結(jié)果顯示:(1)尼古丁組與對照組比較,尼古丁組的α7 nAChR表達(dá)明顯增高(P0.01),MLA+尼古丁組與尼古丁組比較,加入拮抗劑組的α7 nAChR表達(dá)降低(P0.05);(2)PNU組與對照組比較,PNU組的α7 nAChR的表達(dá)增加(P0.05),MLA+PNU組與PNU組相比,α7 nAChR表達(dá)降低(P0.05);(3)s24795組與對照比較,s24795組的α7 nAChR表達(dá)明顯升高(P0.01),MLA+s24795組與s24795組比較,加入拮抗劑組的α7 nAChR表達(dá)明顯降低(P0.01)。檢測Aβ蛋白的表達(dá)結(jié)果為:(1)收集細(xì)胞的上清液及蛋白,分別進(jìn)行檢測。對照組正常的細(xì)胞內(nèi)沒有Aβ蛋白的表達(dá),尼古丁+Aβ組與Aβ組相比,尼古丁+Aβ組的Aβ蛋白表達(dá)均明顯降低(P0.01),MLA+尼古丁+Aβ組與尼古丁+Aβ組比較,MLA+尼古丁+Aβ組的Aβ蛋白的表達(dá)均明顯升高(P0.01);(2)收集細(xì)胞的上清液及蛋白,分別進(jìn)行檢測。對照組正常的細(xì)胞內(nèi)沒有Aβ蛋白的表達(dá),PNU+Aβ組與Aβ組相比,PNU+Aβ組的蛋白表達(dá)均明顯降低(P0.01),MLA+PNU+Aβ組與PNU+Aβ組比較,MLA+PNU+Aβ組的蛋白表達(dá)均升高(P0.05);(3)收集細(xì)胞的上清液及蛋白,分別進(jìn)行檢測。對照組正常的細(xì)胞內(nèi)沒有Aβ蛋白的表達(dá),s24795+Aβ組與Aβ組相比,s24795+Aβ組的Aβ蛋白表達(dá)均明顯降低(P0.01),MLA+s24795+Aβ組與s24795+Aβ組比較,MLA+s24795+Aβ組的Aβ蛋白的表達(dá)均明顯升高(P0.01)。結(jié)論:Aβ寡聚體對星形膠質(zhì)細(xì)胞有明顯的神經(jīng)毒性作用。在星形膠質(zhì)細(xì)胞有多種nAChRs亞單位的表達(dá)。細(xì)胞實驗中,使用三種不同的激動劑刺激星形膠質(zhì)細(xì)胞內(nèi)α7 nAChR,均能夠上調(diào)α7 nAChR的表達(dá)量。星形膠質(zhì)細(xì)胞內(nèi)的α7 nAChR表達(dá)量上調(diào),可能通過協(xié)同細(xì)胞自身的吞噬作用以及分泌降解酶的作用,降解Aβ。
【關(guān)鍵詞】：阿爾茨海默氏病(Alzheimer’s disease AD) β-淀粉樣蛋白 寡聚體 星形膠質(zhì)細(xì)胞 α7 nAChR
【學(xué)位授予單位】：貴州醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R329.2
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• 英文摘要6-9
• 略縮詞表9-10
• 引言10-13
• 材料與方法13-22
• 結(jié)果22-30
• 討論30-35
• 結(jié)論35-36
• 參考文獻(xiàn)36-43
• 綜述43-52
• 參考文獻(xiàn)50-52
• 作者簡歷52-53
• 致謝53-54
• 學(xué)位論文數(shù)據(jù)集54

【相似文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 沈維高;何欣;王振江;;星形膠質(zhì)細(xì)胞的生物學(xué)功能及其與疾病的關(guān)系研究進(jìn)展[J];北華大學(xué)學(xué)報(自然科學(xué)版);2008年06期

2 石軍,張可成,蔡文琴;大鼠腦皮質(zhì)星形膠質(zhì)細(xì)胞的限制性細(xì)胞培養(yǎng)[J];中國組織化學(xué)與細(xì)胞化學(xué)雜志;2000年02期

3 莫永炎,姜勇,陳瑗;腦星形膠質(zhì)細(xì)胞生物學(xué)功能研究進(jìn)展[J];生理科學(xué)進(jìn)展;2002年01期

4 朱潔 ,蔡文琴;成年哺乳動物海馬中的星形膠質(zhì)細(xì)胞可生成新的神經(jīng)元[J];生理科學(xué)進(jìn)展;2002年01期

5 姚君茹,潘三強,呂來清;星形膠質(zhì)細(xì)胞的可塑性[J];解剖學(xué)研究;2002年01期

6 李卉麗,秦綠葉,萬有,韓濟生,于常海;疼痛研究的新亮點:星形膠質(zhì)細(xì)胞[J];生理科學(xué)進(jìn)展;2003年01期

7 陳yN招,徐如祥,徐宗俊,楊志林,姜曉丹;星形膠質(zhì)細(xì)胞可以誘導(dǎo)內(nèi)皮細(xì)胞系緊密連接的形成[J];細(xì)胞生物學(xué)雜志;2003年05期

8 陳青;劉傳勇;;星形膠質(zhì)細(xì)胞的活化機制及功能研究[J];泰山醫(yī)學(xué)院學(xué)報;2006年01期

9 郭進(jìn);何建平;安書成;;星形膠質(zhì)細(xì)胞釋放谷氨酸的途徑及其調(diào)控機制[J];陜西師范大學(xué)繼續(xù)教育學(xué)報;2006年03期

10 于常海;趙睿;;承載期望的“星”:星形膠質(zhì)細(xì)胞[J];科學(xué);2007年06期

中國重要會議論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 劉慶瑩;趙珠峰;朱長庚;;星形膠質(zhì)細(xì)胞在癲癇復(fù)發(fā)中的作用[A];解剖學(xué)雜志——中國解剖學(xué)會2002年年會文摘匯編[C];2002年

2 唐愛輝;王同飛;王世強;;星形膠質(zhì)細(xì)胞鈣活動:腦細(xì)胞網(wǎng)絡(luò)中的第二興奮系統(tǒng)?[A];中國神經(jīng)科學(xué)學(xué)會第六屆學(xué)術(shù)會議暨學(xué)會成立十周年慶祝大會論文摘要匯編[C];2005年

3 池美珠;陳超;錢燕;李劍敏;吳步猛;;產(chǎn)前重復(fù)激素治療對星形膠質(zhì)細(xì)胞發(fā)育的影響[A];浙江省圍產(chǎn)醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2005年

4 魏爾清;;半胱氨酰白三烯受體對星形膠質(zhì)細(xì)胞功能的調(diào)節(jié)作用[A];中國藥理學(xué)會第九次全國會員代表大會暨全國藥理學(xué)術(shù)會議論文集[C];2007年

5 吳建云;王鮮忠;王劍;諶劍波;范光麗;張家驊;;大腦皮質(zhì)星形膠質(zhì)細(xì)胞培養(yǎng)及鑒定[A];中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會動物解剖學(xué)及組織胚胎學(xué)分會第十五次學(xué)術(shù)研討會論文集[C];2008年

6 趙玉武;程曉娟;;星形膠質(zhì)細(xì)胞與腦水腫的形成[A];山東省2013年神經(jīng)內(nèi)科學(xué)學(xué)術(shù)會議暨中國神經(jīng)免疫大會2013論文匯編[C];2013年

7 董其平;柴真;;谷氨酸對培養(yǎng)的星形膠質(zhì)細(xì)胞的鈣活動的影響[A];“基因、進(jìn)化與生理功能多樣性”海內(nèi)外學(xué)術(shù)研討會暨中國生理學(xué)會第七屆比較生理學(xué)學(xué)術(shù)會議論文摘要[C];2009年

8 曾俊;李康生;;柯薩奇病毒感染星形膠質(zhì)細(xì)胞及細(xì)胞因子變化研究[A];新發(fā)和再發(fā)傳染病防治熱點研討會論文集[C];2010年

9 鮑歡;徐曉云;顧曉波;徐霞紅;胡暉;;缺氧后水通道蛋白4在體外培養(yǎng)星形膠質(zhì)細(xì)胞表達(dá)變化的實驗研究[A];中華醫(yī)學(xué)會第十三次全國神經(jīng)病學(xué)學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2010年

10 熊加祥;白云;宋敏;王艷艷;楊曉亞;;星形膠質(zhì)細(xì)胞表達(dá)免疫分子維持大腦免疫穩(wěn)態(tài)[A];中國神經(jīng)科學(xué)學(xué)會第六屆學(xué)術(shù)會議暨學(xué)會成立十周年慶祝大會論文摘要匯編[C];2005年

中國重要報紙全文數(shù)據(jù)庫 前7條

1 記者 胡德榮;星形膠質(zhì)細(xì)胞由“天使”變“魔鬼”原因找到[N];健康報;2012年

2 記者 劉海英;星形膠質(zhì)細(xì)胞可調(diào)節(jié)呼吸強度[N];科技日報;2010年

3 劉霞;腦內(nèi)星形膠質(zhì)細(xì)胞在實驗室培育成功[N];科技日報;2011年

4 汪敏華;大腦星形膠質(zhì)細(xì)胞有兩種新功能[N];解放日報;2003年

5 吳一福;黃芪可調(diào)節(jié)星形膠質(zhì)細(xì)胞“時間模式”[N];中國醫(yī)藥報;2005年

6 南方日報記者 曹斯　實習(xí)生 趙莞 張寧 通訊員 鄒瑩 張淼;用ATP對抗不快樂[N];南方日報;2013年

7 記者 班瑋;德國腦細(xì)胞再生研究取得新進(jìn)展[N];人民日報;2010年

中國博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 曾招;離子通道TRPM7調(diào)節(jié)細(xì)胞生理的分子機制研究[D];蘇州大學(xué);2014年

2 黃維一;骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞旁分泌因子對缺血性腦卒中后星形膠質(zhì)細(xì)胞活性及功能的影響[D];南方醫(yī)科大學(xué);2015年

3 楊俊華;星形膠質(zhì)細(xì)胞來源的ATP促進(jìn)丘腦中的突觸刪除[D];浙江大學(xué);2015年

4 鄧雅婷;龍膽苦苷鎮(zhèn)痛與抗抑郁的中樞作用及機制研究[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2015年

5 李新;星形膠質(zhì)細(xì)胞NDRG2在七氟烷預(yù)處理神經(jīng)保護作用中的機制研究[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2015年

6 鐘志宏;亞鐵離子對星形膠質(zhì)細(xì)胞的損傷作用及香芹酚在實驗性腦出血中的神經(jīng)保護作用[D];上海交通大學(xué);2014年

7 張建成;星形膠質(zhì)細(xì)胞來源的IL-17A對缺血性腦卒中神經(jīng)再生和功能恢復(fù)的影響及機制研究[D];華中科技大學(xué);2015年

8 洪洋;孕酮對Aβ所致星形膠質(zhì)細(xì)胞炎癥反應(yīng)的調(diào)節(jié)作用及機制研究[D];河北醫(yī)科大學(xué);2016年

9 凌云志;帕瑞昔布減輕過氧化氫誘導(dǎo)的大鼠星形膠質(zhì)細(xì)胞氧化應(yīng)激損傷的作用及機制研究[D];安徽醫(yī)科大學(xué);2015年

10 徐進(jìn);腦出血后星形膠質(zhì)細(xì)胞AQP4內(nèi)化及其機制的研究[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2015年

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 龔佩佩;磷酸化MSK1在星形膠質(zhì)細(xì)胞炎癥活化過程中的作用的研究[D];南通大學(xué);2013年

2 何潔玉;糖皮質(zhì)激素對星形膠質(zhì)細(xì)胞分泌GnRH的調(diào)控機制[D];西南大學(xué);2015年

3 張麗麗;脂肪基質(zhì)細(xì)胞誘導(dǎo)分化為星形膠質(zhì)細(xì)胞過程中線粒體凋亡與自噬的關(guān)系[D];河北聯(lián)合大學(xué);2014年

4 燕茹;高同型半胱氨酸血癥致ApoE~(-/-)小鼠腦血管、星形膠質(zhì)細(xì)胞及神經(jīng)元損傷作用研究[D];寧夏醫(yī)科大學(xué);2015年

5 米鵬霞;P物質(zhì)對星形膠質(zhì)細(xì)胞的活化作用及機制研究[D];山西醫(yī)科大學(xué);2015年

6 楊志奇;小鼠皮層內(nèi)移植膠質(zhì)細(xì)胞形態(tài)及功能重建研究[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2015年

7 陳雅南;敲除星形膠質(zhì)細(xì)胞的dicer對中樞神經(jīng)系統(tǒng)的影響[D];杭州師范大學(xué);2015年

8 馬輝;星形膠質(zhì)細(xì)胞上酸敏感離子通道1a在顳葉癲癇發(fā)生中的作用研究[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2015年

9 周亞蘭;IFN-γ介導(dǎo)T細(xì)胞參與炎性痛慢性化機制的研究[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2015年

10 鄧子輝;瘦素抑制星形膠質(zhì)細(xì)胞縫隙連接蛋白-43表達(dá)改善腦缺血再灌注損傷的機制研究[D];中國人民解放軍醫(yī)學(xué)院;2015年

  本文關(guān)鍵詞：體外培養(yǎng)星形膠質(zhì)細(xì)胞α7尼古丁型乙酰膽堿能受體調(diào)控β-淀粉樣蛋白聚集的作用，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：293198