本文關鍵詞：PPARγ通過對RUVBL2表達調控影響脂聯(lián)素分泌的研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：脂聯(lián)素是近來發(fā)現(xiàn)的一種重要的脂肪細胞因子,在調節(jié)脂質和葡萄糖代謝方面扮演著重要角色。它可刺激脂肪酸氧化、抑制肝糖原異生和增強胰島素敏感性。同時在慢性炎癥病理調節(jié)、抗動脈粥樣硬化及通過神經系統(tǒng)調節(jié)進食和體重等功能調控方面也不斷地有新的發(fā)現(xiàn)。目前,關于脂聯(lián)素的轉錄水平調控和翻譯后修飾的報道較多,但對RUVBL2調控脂聯(lián)素分泌的研究未見報道。本文旨在通過研究囊泡融合相關蛋白RUVBL2的轉錄調控來研究脂聯(lián)素分泌的后期調控過程,以期從囊泡融合調控的角度來解釋肥胖個體血液中脂聯(lián)素水平減少的現(xiàn)象。本文主要以前體脂肪細胞系3T3-L1以及HEK293細胞系為研究模型。利用實時定量PCR、染色質免疫共沉淀、細胞轉染等方法探討了PPARγ通過調控RUVBL2的表達從而調控脂聯(lián)素囊泡轉運改變脂聯(lián)素胞外分泌的機制。研究結果如下:1.通過實時定量PCR以及蛋白質免疫印跡法檢測成脂分化前體脂肪細胞,發(fā)現(xiàn)PPARγ和RUVBL2在成脂分化過程中時間表達順序一致。2.生物信息學預測RUVBL2啟動子區(qū)的PPRE作用位點,利用細胞共轉染、雙熒光素酶報告系統(tǒng)以及染色質免疫共沉淀確定PPARγ結合的具體區(qū)域并促進RUVBL2表達。3.通過基因敲減、抑制劑刺激分析發(fā)現(xiàn)RUVBL2的水平降低可下調脂聯(lián)素的分泌,而且PPARγ水平的下調也會降低胞內RUVBL2水平及脂聯(lián)素的分泌。4.利用基因超表達實驗發(fā)現(xiàn),RUVBL2的水平上調可促進脂聯(lián)素的分泌,PPARγ水平上調也會增加脂聯(lián)素胞外的分泌。
【關鍵詞】：脂聯(lián)素 脂肪細胞 Ruvb樣蛋白2 過氧化物酶體增殖活化受體
【學位授予單位】：華中農業(yè)大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R363
【目錄】：

• 摘要8-9
• Abstract9-10
• 縮略語表10-11
• 1 前言11-23
• 1.1 脂肪組織及脂肪細胞分化調控11-14
• 1.1.1 脂肪組織11
• 1.1.2 脂肪細胞因子11-12
• 1.1.3 脂肪細胞分化過程的基因調控12-14
• 1.1.4 肥胖與代謝綜合癥14
• 1.2 PPARγ 的結構與功能14-16
• 1.2.1 PPARγ 的結構14-15
• 1.2.2 PPARγ 的功能及生物學特性15-16
• 1.3 脂聯(lián)素的結構與功能16-18
• 1.3.1 脂聯(lián)素的結構16-18
• 1.3.2 脂聯(lián)素的功能18
• 1.4 RUVBL2 蛋白的結構與功能18-21
• 1.4.1 RUVBL2 的結構18-20
• 1.4.2 RUVBL2 的功能及研究進展20-21
• 1.5 研究目的與意義21-23
• 2 材料與方法23-36
• 2.1 實驗材料23-24
• 2.1.1 細胞系23
• 2.1.2 實驗小鼠23
• 2.1.3 載體、菌株及感受態(tài)23
• 2.1.4 主要試劑23-24
• 2.2 主要儀器24-25
• 2.3 分子生物學軟件及相關網站25
• 2.4 實驗方法25-36
• 2.4.1 細胞培養(yǎng)及轉染25-27
• 2.4.2 目的片段的擴增、純化與載體構建27-30
• 2.4.3 RUVBL2 啟動子區(qū)域PPARγ 位點的預測30
• 2.4.4 雙熒光素酶報告系統(tǒng)檢測30-31
• 2.4.5 染色質免疫共沉淀（Ch IP）31-32
• 2.4.6 實時定量PCR32-33
• 2.4.7 RNA的提取33-34
• 2.4.8 反轉錄34
• 2.4.9 Western Blotting34-35
• 2.4.10 數據統(tǒng)計分析35-36
• 3 結果與分析36-50
• 3.1 RUVBL2 的組織表達譜36
• 3.2 3T3-L1 成脂分化過程中PPARγ 和RUVBL2 的表達36-38
• 3.2.1 PPARγ 和RUVBL2 的mRNA水平變化36-37
• 3.2.2 3T3-L1 成脂分化過程中PPARγ 和RUVBL2 蛋白表達變化37-38
• 3.3 PPARγ 對RUVBL2 啟動子的調控38-44
• 3.3.1 RUVBL2 啟動子順式元件的分析及啟動子的克隆38-40
• 3.3.2 PPARγ 上調RUVBL2 啟動子活性40
• 3.3.3 PPARγ 對RUVBL2 突變啟動子的影響40-42
• 3.3.4 PPARγ 與RUVBL2 啟動子特異性的結合42-43
• 3.3.5 RUVBL2 啟動子上PPRE元件保守位點的分析43-44
• 3.4 RUVBL2 敲減以及 PPARγ 激動劑/抑制劑對脂聯(lián)素分泌的影響44-46
• 3.4.1 RUVBL2 敲減脂聯(lián)素分泌的影響44-45
• 3.4.2 PPARγ 激動劑/抑制劑對脂聯(lián)素分泌的影響45-46
• 3.5 RUVBL2 以及 PPARγ 超表達對脂聯(lián)素分泌的影響46-50
• 3.5.1 穩(wěn)定轉染脂聯(lián)素基因HEK293 細胞的檢測46
• 3.5.2 RUVBL2 超表達對脂聯(lián)素分泌的影響46-48
• 3.5.3 PPARγ 超表達對脂聯(lián)素分泌的影響48-50
• 4 討論50-52
• 5 結論與創(chuàng)新點52-53
• 5.1 結論52
• 5.2 創(chuàng)新點52-53
• 參考文獻53-58
• 致謝58

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