發(fā)布時間：2020-11-02 00:54

　　 1998年發(fā)現(xiàn)的Orexin是一類小分子神經(jīng)肽，也稱hypocretin(hypocretin-1和hypocretin-2)，由外側(cè)下丘腦Orexin神經(jīng)元產(chǎn)生，有兩個單體：Orexin-A和Orexin-B。它們是來自同一基因轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物。Orexin-A由33個氨基酸構(gòu)成，其中有四個半胱氨酸形成鏈內(nèi)的二硫鍵。Orexin系統(tǒng)主要通過Orexin-1（OX1R）受體和Orexin-2(OX2R)受體發(fā)揮作用，兩受體均為G-蛋白偶聯(lián)受體，OX1R和Orexin-A的親和力高于Orexin-B，而OX2R與Orexin-A和Orexin-B親和力相同。Orexin神經(jīng)元的投射幾乎遍布大腦的各個腦區(qū)，在維持覺醒中具有重要的意義，并且基因敲除小鼠或其受體基因突變可引起發(fā)作性睡眠病[1]。同時，研究發(fā)現(xiàn)Orexin神經(jīng)元可以投射到海馬（Hp），與空間學(xué)習(xí)記憶密切相關(guān)[2-4]。 內(nèi)嗅皮層（entorhinalcortex, EC）在海馬和聯(lián)合皮層的雙向信息交流中起著接替站的作用。EC淺層主要神經(jīng)元接受新皮層的輸入，投射至海馬。深層主要接受海馬CA1和下托的輸入，將其傳回至新皮層。EC參與形成的海馬-EC-新皮層環(huán)路在情景記憶的形成以及鞏固中發(fā)揮重要的作用[5]。EC可分為外側(cè)內(nèi)嗅皮層（LEC）和內(nèi)側(cè)內(nèi)嗅皮層（MEC）。目前認(rèn)為MEC主要參與傳遞和處理空間信息，在空間認(rèn)知功能中具有重要的意義[6-9]。 本研究采用多導(dǎo)睡眠記錄和微注射技術(shù)，首先觀察內(nèi)嗅皮層內(nèi)，外源性的OrexinA對大鼠睡眠-覺醒周期時間的影響，然后采用T-迷宮交替選擇模式初步觀察內(nèi)嗅皮層OrexinA對大鼠空間記憶的影響，之后采用曠場實驗觀察微注射OrexinA對大鼠運動功能及探索行為的影響。結(jié)果如下： 1． Orexin受體在EC中的表達及在淺層中與reelin和calbindin的共表達 對成年大鼠EC腦片進行OX1R和OX2R免疫熒光化學(xué)檢測，觀察orexin受體在EC中正常表達和在淺層中與reelin和calbindin的共表達情況。結(jié)果顯示：淺層中OX1R的表達較深層要高得多，OX2R在EC中的表達模式與OX1R類似；OX1R在reelin陽性細胞和calbindin陽性細胞中均有表達，表明OX1R可能廣泛表達于EC淺層的主要神經(jīng)元中。同時考慮到EC的reelin和calbindin信號在空間學(xué)習(xí)記憶中的重要作用，這也暗示了Orexin受體在空間學(xué)習(xí)記憶中的重要作用。 2．Orexin A對睡眠-覺醒周期的影響 在內(nèi)嗅皮層腦區(qū)微注射不同劑量Orexin A，觀察大鼠睡眠-覺醒的變化。與ACSF自身對照相比，分別給大鼠內(nèi)側(cè)內(nèi)嗅皮層雙側(cè)微注射不同濃度的0.04nmol,0.06nmol,0.1nmol orexinA后3小時11：00～12：00、12：00～13：00、13：00～14：00覺醒周期時間無影響（P0.05），給藥后24h覺醒周期時間也無顯著差異（P0.05）。及在11：00～14：003小時內(nèi)對覺醒時間無影響（P0.05），在11：00～14：003h內(nèi)NREM時間無影響（P0.05），在11：00～14：003小時后REM也無影響（P0.05），即對3h內(nèi)（11：00～14：00）大鼠總睡-眠覺醒時間無顯著性差異（P0.05）。結(jié)果顯示大鼠內(nèi)嗅皮層微注射OrexinA對它的睡眠-覺醒周期無影響。 3．Orexin A受體阻斷劑SB-334867對睡眠-覺醒周期的影響 在內(nèi)嗅皮層腦區(qū)微注射Orexin A受體阻斷劑SB-334867，觀察睡眠-覺醒周期變化。與DMSO自身對照相比，給大鼠內(nèi)側(cè)內(nèi)嗅皮層雙側(cè)微注射SB-334867（0.1nmol，5μl）后3小時11：00～12：00、12：00～13：00、13：00～14：00覺醒周期時間無影響（P0.05），給藥后24h覺醒周期時間也無顯著差異（P0.05）。及在11：00～14：003小時內(nèi)對覺醒時間無影響（P0.05），在11：00～14：003h內(nèi)NREM時間無影響（P0.05），在11：00～14：003小時后REM也無影響（P0.05），即對3h內(nèi)（11：00～14：00）大鼠總睡-眠覺醒時間無顯著性差異（P0.05）。表明大鼠內(nèi)嗅皮層微注射SB-334867對睡眠-覺醒周期無影響。 4．EC腦區(qū)Orexin A對空間記憶的影響 1）Orexin A受體阻斷劑SB-334867對空間記憶的影響在內(nèi)嗅皮層腦區(qū)微注射，分別按兩種T-迷宮模式（保持模式，獲得模式），觀察對空間記憶的影響。連續(xù)訓(xùn)練大鼠，在內(nèi)側(cè)內(nèi)嗅皮層區(qū)微注射，對大鼠DMSO組間對照和OrexinA受體阻斷劑SB-334867給藥后的T-迷宮選擇正確次數(shù)進行統(tǒng)計。給大鼠內(nèi)嗅皮層雙側(cè)微注射SB-334867（6mM，0.5μl），T-迷宮交替選擇正確次數(shù)明顯減少，正確率下降78%，有顯著性差異（p0.05）。提示SB-334867影響了空間記憶，降低了空間記憶功能。即內(nèi)嗅皮層內(nèi)源性O(shè)rexinA促進了空間記憶功能。 2）敲低Orexin A受體表達（RAAV2/1-OR1-shRNA-EGFP）對大鼠空間記憶的影響大鼠內(nèi)嗅皮層微注射手術(shù)，在內(nèi)嗅皮層腦區(qū)微注射空白對照組SCR（RAAV2/1-SCR-shRNA-EGFP）及干擾組OR1(RAAV2/1-OR1-shRNA-EGFP)，觀察內(nèi)嗅皮層敲低Orexin A受體表達后對大鼠空間記憶的影響。以SCR對照在內(nèi)嗅皮層微注射OR1干擾病毒，分兩組，對大鼠SCR組間對照組和OR1干擾組分別21天后開始T-迷宮訓(xùn)練，訓(xùn)練持續(xù)21天。對其結(jié)果進行統(tǒng)計，交替選擇正確次數(shù)減少，正確率下降48%，有顯著性差異（p0.05）。提示，敲低Orexin A受體表達，降低了空間記憶功能。即內(nèi)嗅皮層Orexin A受體參與了且提高了空間記憶能力。 5.術(shù)后內(nèi)嗅皮層微注射藥物對大鼠探索行為及運動功能的影響 大鼠內(nèi)嗅皮層套管埋置手術(shù)恢復(fù)后，在內(nèi)嗅皮層腦區(qū)微注射對照ACSF,DMSO以及藥物組Orexin A及其受體阻斷劑SB-334867，觀察對探索行為和運動功能的影響。在內(nèi)嗅皮層分別微注射藥物（ACSF,DMSO,orexin A,SB-334867）分四組，對大鼠ACSF,DMSO組間對照和Orexin A及受體阻斷劑SB-334867給藥15min后在曠場中的站立次數(shù)和所走的格子數(shù)進行統(tǒng)計。給大鼠內(nèi)嗅皮層微注射(0.1nmol，0.5μl)Orexin A，大鼠的站立次數(shù)和行走的格子數(shù)無明顯變化，無顯著性差異（P0.05）；微注射（6mM，0.5μl）Orexin A受體阻斷劑SB-334867，大鼠站立次數(shù)和行走的格子數(shù)無明顯變化，無顯著差異（P0.05）。表明術(shù)后內(nèi)嗅皮層微注射藥物對大鼠探索行為及運動功能無影響。 綜上所述，本研究結(jié)果表明:一，EC區(qū)OR1在reelin陽性和calbindin陽性神經(jīng)元中都有表達。二，EC微注射不同劑量Orexin A對大鼠的睡眠-覺醒周期無影響。三，EC微注射Orexin A受體阻斷劑SB-334867對大鼠睡眠-覺醒周期無影響。四，EC腦區(qū)的orexinA信號對大鼠空間記憶功能有重要影響。五，術(shù)后微注射藥物對大鼠的探索行為和運動功能無影響。
【學(xué)位單位】：第三軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位年份】：2012
【中圖分類】：R338
【文章目錄】：
英文縮寫一覽表
英文摘要
中文摘要
前言
第一部分 大鼠內(nèi)嗅皮層微注射 Orexin-A 對睡眠-覺醒的影響
    前言
    材料與方法
    結(jié)果
    討論
    參考文獻
第二部分 大鼠內(nèi)嗅皮層微注射 Orexin-A 對空間-記憶的影響
    前言
    材料和方法
    結(jié)果
    討論
    參考文獻
全文總結(jié)
致謝
文獻綜述 Orexin 及其受體的主要生理功能及相關(guān)機制
    參考文獻
在讀碩士期間發(fā)表的論文

【相似文獻】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 張川里;電刺激和低鎂引起的大鼠內(nèi)嗅皮層游離鈣和鉀離子濃度的動態(tài)變化[J];生物物理學(xué)報;1994年03期

2 周文波，蔣芝華，倪紫美，周長福;固定后腦組織的HRP軸突追蹤-光鏡和電鏡研究[J];中國神經(jīng)科學(xué)雜志;1996年01期

3 盧守祥;薛振東;趙鳴;賀建廣;;大白鼠海馬傳入纖維的來源——HRP法研究[J];解剖學(xué)報;1985年03期

4 章惠英;吳晉寶;秦月琴;;蒙古種沙土鼠背海馬傳入纖維的來源[J];解剖學(xué)雜志;1992年04期

5 胡志安;夏建霞;;覺醒系統(tǒng)的活動對學(xué)習(xí)記憶的影響[J];第三軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報;2011年11期

6 楊欽照;刺激大腦皮層所引起的皮膚電反應(yīng)及其傳導(dǎo)通路[J];復(fù)旦學(xué)報(自然科學(xué)版);1964年01期

7 李紅運,羅東明,劉祚周;慢性痛大鼠痛行為的變化與某些腦區(qū)Fos表達的關(guān)系[J];針刺研究;1994年Z1期

8 郭樹仁,吳俊芳;海馬長時程增強的研究進展[J];中國臨床藥理學(xué)與治療學(xué);1999年04期

9 徐虹,韓太真,陳耀文,秦達念;與長時程增強相關(guān)的基因表達的研究進展[J];生理科學(xué)進展;2001年02期

10 王錦琰 ,羅非;海馬神經(jīng)元參與空間定位的長時程記憶[J];生理科學(xué)進展;2002年03期

相關(guān)博士學(xué)位論文 前10條

1 彭炳蔚;內(nèi)側(cè)顳葉癲癇與記憶關(guān)系及影響因素的研究[D];中國協(xié)和醫(yī)科大學(xué);2008年

2 許正浩;低頻率深部腦刺激對大鼠電點燃癲癇的干預(yù)作用及其機制研究[D];浙江大學(xué);2012年

3 董靜慧;膠質(zhì)細胞活化的研究[D];中國科學(xué)院研究生院（上海生命科學(xué)研究院）;2005年

4 王巖;損傷引起的中樞神經(jīng)系統(tǒng)結(jié)構(gòu)可塑性研究[D];中國科學(xué)院研究生院（上海生命科學(xué)研究院）;2005年

5 朱寧;幾種與神經(jīng)可塑性有關(guān)的分子在出生后小鼠和鳴禽腦內(nèi)的動態(tài)表達[D];北京師范大學(xué);2006年

6 有慧;嗅覺系統(tǒng)結(jié)構(gòu)和功能MR成像研究[D];中國協(xié)和醫(yī)科大學(xué);2007年

7 張立華;影像學(xué)技術(shù)在顳葉癲癇中的應(yīng)用價值研究[D];中國協(xié)和醫(yī)科大學(xué);2007年

8 錢麗霞;Alzheimer病及輕度認(rèn)知障礙的MRS、DWI和MTI隨訪研究及其與ApoE基因型關(guān)系的研究[D];天津醫(yī)科大學(xué);2005年

9 劉欣;去傳入海馬差異表達基因的篩選和SPARC表達[D];中國科學(xué)院研究生院（上海生命科學(xué)研究院）;2005年

10 涂艷陽;學(xué)習(xí)記憶相關(guān)基因的篩選、鑒定與功能研究[D];中國科學(xué)院研究生院（上海生命科學(xué)研究院）;2005年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 齊愛萍;大鼠內(nèi)嗅皮層微注射Orexin-A對睡眠—覺醒及空間記憶的影響[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2012年

2 楊位霞;OREXIN-A對癲癇大鼠學(xué)習(xí)記憶功能影響的研究[D];泰山醫(yī)學(xué)院;2011年

3 任彩霞;原發(fā)全身強直陣攣性癲癇內(nèi)嗅皮層和嗅周皮質(zhì)體積與認(rèn)知的相關(guān)性[D];大連醫(yī)科大學(xué);2011年

4 張尚榮;精神分裂癥患者血漿orexin-A水平及藥物治療的影響[D];中國人民解放軍軍醫(yī)進修學(xué)院;2012年

5 張丹;OrexinA對大鼠內(nèi)側(cè)內(nèi)嗅皮層和前額葉皮層深層神經(jīng)元的作用及其機制研究[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2012年

6 王天昊;覺醒肽（orexin-A）對大鼠酒精性昏迷促醒作用中單胺能神經(jīng)遞質(zhì)機制的研究[D];中國人民解放軍軍醫(yī)進修學(xué)院;2009年

7 李洋;促覺醒肽orexin-A和穩(wěn)態(tài)因子腺苷調(diào)節(jié)大鼠內(nèi)嗅皮層淺層主要神經(jīng)元興奮性及其機制研究[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2010年

8 王臻;長時連續(xù)作業(yè)對大鼠覺醒能力的損害及機制研究[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2006年

9 張春青;Orexin-A對大鼠前額皮層神經(jīng)元谷氨酸受體功能的影響及其機制的研究[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2007年

10 王東;Orexin-A對氯胺酮麻醉老年大鼠蘇醒的影響及其機制研究[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2009年

本文編號：2866345