【摘要】：研究背景隨著全球健康和世界經(jīng)濟(jì)的高速發(fā)展進(jìn)程,傳染疾病在世界范圍內(nèi)的傳播變得更加快捷,特別是流感病毒,每年的流感疫情都會(huì)導(dǎo)致大約3百萬(wàn)-5百萬(wàn)的病人入院治療�？共《舅幬锸乾F(xiàn)階段主要的治療手段,但是由于其存在藥物耐受,治療窗口期短等問題,急需有其他手段來(lái)更有效的治療流感病毒感染�？贵w治療是近些年來(lái)研究的熱點(diǎn),通過(guò)有效的抗體篩選手段,篩選得到能夠有效中和流感病毒的抗體成為眾多科學(xué)家研究的目標(biāo)。研究目的應(yīng)用記憶B細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)平臺(tái),從免疫流感疫苗的志愿者血液中篩選得到具有中和H1N1流感病毒的抗體,并通過(guò)體外結(jié)合活性,中和活性等功能性實(shí)驗(yàn),初步評(píng)估篩選得到的抗體,并為研發(fā)抗流感病毒提供有效治療藥物。研究方法基于記憶B細(xì)胞培養(yǎng)平臺(tái),從免疫流感疫苗的志愿者血液中分離PBMC,磁珠分選CD19~+CD27~+記憶B細(xì)胞,在含IL-2,IL-21及293T-mCD40L滋養(yǎng)層細(xì)胞的培養(yǎng)基中培養(yǎng)13天,進(jìn)行ELISA檢測(cè)篩選陽(yáng)性有效孔;對(duì)陽(yáng)性有效孔進(jìn)行裂解,反轉(zhuǎn)錄,單細(xì)胞PCR獲得抗體基因,并構(gòu)建到IgG抗體表達(dá)載體上進(jìn)行表達(dá),純化;進(jìn)而,利用ELISA結(jié)合活性實(shí)驗(yàn),Western-Blot實(shí)驗(yàn),HAI實(shí)驗(yàn)等進(jìn)行體外實(shí)驗(yàn)鑒定;研究結(jié)果我們成功的建立起記憶B細(xì)胞培養(yǎng)平臺(tái),并篩選得到16株具有H1N1蛋白結(jié)合活性的抗體,其中,7株具有H1N1熒光病毒中和活性(單克隆抗體Hb-B3,B5,C6,E7,A8,A9,C9具有強(qiáng)的中和活性),并且,Hb-B5和Hb-A9能夠廣譜結(jié)合流感病毒的HA蛋白(H1,H3,H5,H7,H10),其中Hb-A9具有流感病毒組1(H1N1,H5N1,H5N6)和組2的交叉中和活性(H7N9)。結(jié)論單克隆抗體Hb-B3,B5,C6,E7,A8,A9,C9在實(shí)驗(yàn)中展現(xiàn)出強(qiáng)的中和活性,其中Hb-B5在體外結(jié)合實(shí)驗(yàn)中顯示出廣譜結(jié)合活性,可以為之后研究流感病毒診斷試劑開發(fā)提供依據(jù),抗體Hb-A9具有很好的流感病毒組1和組2中和活性,可以作為潛力抗體進(jìn)行下一步的研究,并應(yīng)用到臨床治療上。
【學(xué)位授予單位】：廣州醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R392
【圖文】：

通常被簡(jiǎn)稱為流感，為一種由流在世界各地傳播。每年的流感季都造成約 3感在北半球及南半球爆發(fā)的季節(jié)主要為冬季致死的案例多半發(fā)生在免疫力低下的小孩感染流感病毒的癥狀可輕可重[3]，最常見的癥嚨痛、咳嗽和疲倦感等（圖 1）。被感染者持續(xù)一周后解除，但咳嗽的癥狀可能會(huì)持續(xù)嘔吐癥狀[4]，例如孩童感染 H5N1 亞型流感人感染者中并不常見；惡心和嘔吐一般發(fā)生感可能的誘發(fā)的并發(fā)癥包括病毒性肺炎、次疾病惡化（如氣喘或心臟衰竭）等，給我

圖 2：流感病毒電鏡掃描圖類的血清型包含 H1N1、H2N2、H3N2、10N7、H7N9[11]。其中，根據(jù)它們的組 1 包括 H1，H2，H5，H6，H8，，H4，H7 ，H10，H14 和 H15[12]。近, 也包含在 HA 的分型里面[13, 14]，這組 1 的流感病毒中（圖 3）。

圖 2：流感病毒電鏡掃描圖能感染人類的血清型包含 H1N1、H2N2、H3N2、H5N1、H7H7N3、H10N7、H7N9[11]。其中，根據(jù)它們的系統(tǒng)發(fā)育關(guān) 1 和組 2：組 1 包括 H1，H2，H5，H6，H8，H9，H11，2 包括 H3，H4，H7 ，H10，H14 和 H15[12]。近期還在蝙H17, H18, 也包含在 HA 的分型里面[13, 14]，這兩個(gè)新的亞也被分到組 1 的流感病毒中（圖 3）。

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本文編號(hào)：2790894