本文關(guān)鍵詞：白紋伊蚊唾液腺C-型凝集素2的原核表達(dá)與組織表達(dá)特性，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的克隆并表達(dá)白紋伊蚊唾液腺C-型凝集素2(C-type lectin2,CTL2)蛋白。方法根據(jù)白紋伊蚊(羅馬株)C-型凝集素2開(kāi)放讀碼框序列(Aalb_CTL2)(Gen Bank:AY826069.1),設(shè)計(jì)特異引物采用RT-PCR技術(shù)從白紋伊蚊廣州株雌蚊體內(nèi)擴(kuò)增獲得Aalb_CTL2基因。利用美國(guó)國(guó)家生物技術(shù)信息中心(NCBI)、瑞士生物信息學(xué)研究所的蛋白分析專家系統(tǒng)(Ex PASy),結(jié)合其他生物信息學(xué)分析軟件包,分析預(yù)測(cè)該蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)功能;進(jìn)而將其克隆到原核表達(dá)質(zhì)粒p ET-28a(+)中,重組質(zhì)粒在大腸桿菌Rosetta/DE3中經(jīng)異丙硫代-β-D半乳糖苷(IPTG)誘導(dǎo)表達(dá),SDS-PAGE電泳分析表達(dá)結(jié)果,表達(dá)產(chǎn)物采用Ni-NTA-Agarose柱進(jìn)行純化。最后采用western blotting方法驗(yàn)證所獲得重組表達(dá)蛋白;同時(shí)采用real-time RT-PCR技術(shù)構(gòu)建Aalb_CTL2唾液腺、中腸、脂肪體不同組織表達(dá)譜。結(jié)果1.成功克隆得Aalb_CTL2基因,全長(zhǎng)456bp,編碼151個(gè)氨基酸,理論分子量為17335Da,等電點(diǎn)為9.03。重組質(zhì)粒經(jīng)PCR、雙酶切及測(cè)序表明p ET-28a(+)-Aalb_CTL2重組質(zhì)粒原核表達(dá)體系成功構(gòu)建;SDS-PAGE分析結(jié)果顯示,重組質(zhì)粒在Rosetta/DE3獲得高效表達(dá),主要以包涵體形式存在。Western blotting結(jié)果顯示重組蛋白可被抗6-His tag抗體識(shí)別。重組蛋白經(jīng)變性、復(fù)性、Ni-NTA-Agarose柱層析后獲得單一的重組蛋白。2.組織表達(dá)譜顯示Aalb_CTL2在雌蚊唾液腺表達(dá)水平顯著高于在中腸和脂肪體中(P0.05)。結(jié)論1.成功構(gòu)建p ET-28a(+)-Aalb_CTL2重組原核表達(dá)質(zhì)粒并表達(dá)出融合Aalb_CTL2蛋白。2.Aalb_CTL2在雌蚊唾液腺特異高表達(dá)。
【關(guān)鍵詞】：唾液腺 白紋伊蚊 C型凝集素2 原核表達(dá)
【學(xué)位授予單位】：貴陽(yáng)醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R384.1
【目錄】：

• 中文摘要4-5
• 英文摘要5-8
• 略縮詞表8-10
• 引言10-12
• 材料與方法12-28
• 結(jié)果28-37
• 討論37-39
• 結(jié)論39-40
• 參考文獻(xiàn)40-44
• 綜述44-56
• 參考文獻(xiàn)52-56
• 作者簡(jiǎn)歷56-57
• 致謝57-58
• 學(xué)位論文數(shù)據(jù)集58

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前1條

1 吳家紅;程金芝;孫宇;陳璐;;白紋伊蚊基因表達(dá)定量PCR內(nèi)參基因的選擇[J];中國(guó)人獸共患病學(xué)報(bào);2011年05期

  本文關(guān)鍵詞：白紋伊蚊唾液腺C-型凝集素2的原核表達(dá)與組織表達(dá)特性，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

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本文編號(hào)：263778