本文關鍵詞：人巨細胞病毒利用干擾素誘導跨膜蛋白促進病毒組裝中心形成，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：干擾素誘導跨膜蛋白(interferon-induced transmembrane proteins,IFITMs)已經(jīng)被鑒定為宿主I型干擾素防御系統(tǒng)中的關鍵效應分子。大多數(shù)RNA病毒對宿主細胞的入侵階段被IFITMs所抑制。然而,在DNA病毒感染過程中IFITMs所發(fā)揮的作用尚待深入研究。在本論文中,我們發(fā)現(xiàn)人巨細胞病毒(human cytomegalovirus,HCMV),一類大分子雙鏈DNA病毒,在感染人成纖維細胞過程中利用IFITMs以促進病毒組裝中心(virion assembly compartment,v AC)的形成。實驗表明IFITMs在人胚肺成纖維細胞系(MRC5)中組成型表達,而HCMV感染晚期抑制了IFITM蛋白的累積;在MRC5細胞中過表達IFITM蛋白能夠促進HCMV復制3-5倍,而利用RNA干擾(RNAi)抑制IFITM蛋白的表達后,巨細胞病毒的復制在第8天降低約100倍;RNA干擾下調(diào)IFITMs并未影響到巨細胞病毒DNA復制和基因表達,但病毒組裝中心(v AC)的典型球狀結(jié)構卻不能形成,我們同時利用電鏡驗證了在IFITM敲低的細胞中病毒病毒顆粒組裝缺陷,并產(chǎn)生感染性較弱的病毒顆粒。有趣的是,單純皰疹病毒,一種與HCMV密切相關的人類皰疹病毒,其在MRC5細胞中的復制在IFITMs蛋白下調(diào)后卻不受影響。這些結(jié)果表明IFITMs特異地參與了HCMV復制所必需的信號通路。
【關鍵詞】：HCMV HSV-1 成纖維細胞 IFITMs RNAi vAC
【學位授予單位】：蘇州大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R373.11
【目錄】：

• 中文摘要4-5
• Abstract5-8
• 前言8-10
• 第一部分 IFITMS在人巨細胞病毒感染中的作用10-24
• 一、材料與方法10-15
• 1.1 質(zhì)粒和試劑10
• 1.2 病毒和細胞系10-11
• 1.3 SHRNA敲低11
• 1.4 病毒生長分析11
• 1.5 WESTERN印跡11-13
• 1.6 免疫熒光13
• 1.7 DNA和RNA的分析13-15
• 二、結(jié)果15-22
• 2.1 HCMV感染抑制IFITM基因表達15-19
• 2.2 人體成纖維細胞IFITM過表達無法抑制HCMV復制19-20
• 2.3 IFITMS的RNAI敲低抑制HCMV復制但不抑制HSV復制20-22
• 三、討論22-24
• 第二部分 IFITMS促進HCMV病毒組裝中心的形成24-37
• 一、材料與方法24-26
• 1.1 質(zhì)粒和試劑24
• 1.2 HCMV病毒純化24-25
• 1.3 電鏡分析25-26
• 二、結(jié)果26-34
• 2.1 下調(diào)IFITMs蛋白不影響HCMV基因表達和DNA的合成，但降低了病毒感染性26-28
• 2.2 IFITM是病毒正確形成vAC所必需28-31
• 2.3 通過電子顯微鏡超微結(jié)構分析揭示IFITM敲低后病毒組裝發(fā)生缺陷31-34
• 三、討論34-37
• 參考文獻37-44
• 綜述44-56
• 參考文獻51-56
• 附錄56-57
• 攻讀學位期間發(fā)表文章57-58
• 致謝58-59

【共引文獻】

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  本文關鍵詞：人巨細胞病毒利用干擾素誘導跨膜蛋白促進病毒組裝中心形成，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：260653