本文關(guān)鍵詞：組蛋白脫乙�；�6抑制單純皰疹病毒Ⅰ型的入核運輸，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：單純皰疹病毒I型(HSV-1)是一種常見的致病雙鏈DNA病毒,易感于上皮細胞,引起口唇皰疹等疾病。同時HSV-1病毒可從原發(fā)病灶傳送到神經(jīng)組織,并在三叉神經(jīng)節(jié)形成潛伏感染,也容易誘發(fā)神經(jīng)系統(tǒng)疾病。實驗室前期研究發(fā)現(xiàn),HSV-1感染過程中會激發(fā)乙�；奈⒐艿鞍�(Acetylatedα-tubulin)的表達,使微管處于穩(wěn)定狀態(tài),利于病毒在細胞中的運輸過程。調(diào)控α-tubulin乙酰化程度的一個重要的宿主蛋白是組蛋白脫乙�；�6(HDAC6)。HDAC6是組蛋白脫乙�；�(HDACs)家族中唯一主要分布在細胞質(zhì)中,并具有去乙酰化和泛素化活性的激酶,參與調(diào)控多種細胞質(zhì)蛋白的翻譯后修飾過程。本課題集中研究HDAC6在HSV-1感染過程中起的作用,并初步探討相關(guān)機制。本課題通過抑制劑處理,si RNA干擾及轉(zhuǎn)染質(zhì)粒過表達HDAC6等一系列實驗手段,探討HDAC6對病毒HSV-1的入核運輸過程中的影響。實驗結(jié)果顯示,HSV-1感染早期(2、4、6 h),HDAC6的表達受到抑制;同時HDAC6的底物,α-tubulin和HSP90的乙�；潭纫搽S著HSV-1感染而提高。使用抑制劑處理或si RNA干擾HDAC6后,其表達量和活性受到抑制;而無論空斑實驗,還是從基因水平和蛋白水平檢測,都證明HSV-1的感染能力增強。脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染質(zhì)粒到細胞從而過表達HDAC6后,則明顯抑制了HSV-1的感染。綜上,宿主蛋白HDAC6可以抑制HSV-1在細胞內(nèi)的運輸過程。此外,本研究還初步探討了HSV-1感染過程中引起HDAC6下調(diào)和活性抑制的原因及機制。圍繞HDAC6相關(guān)蛋白,研究病毒可能影響的通路,同時研究病毒蛋白VP22在其中所起的作用。實驗發(fā)現(xiàn),HSV-1感染過程中Rho家族中的Rho A、ROCK1、ROCK2表達下調(diào),蛋白TPPP1和轉(zhuǎn)錄因子p300表達上調(diào),三種因素都能導(dǎo)致HDAC6活性受到抑制。通過si RNA干擾VP22或過表達VP22發(fā)現(xiàn),HSV-1病毒蛋白VP22通過影響TPPP1和p300參與病毒入核運輸?shù)恼{(diào)控過程。病毒的生存依附于宿主細胞,整個生活周期與宿主細胞息息相關(guān)。探討病毒與宿主之間的相互關(guān)系,利于了解病毒并對其加以控制,同時也可為尋找新的抗病毒治療靶點提供參考依據(jù)。
【關(guān)鍵詞】：組蛋白脫乙酰化酶6 單純皰疹病毒I型 病毒胞內(nèi)運輸 微管乙�；� p300
【學(xué)位授予單位】：暨南大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R373
【目錄】：

• 摘要3-4
• Abstract4-5
• 英文縮寫對照表5-9
• 第一部分 前言9-19
• 1. 單純皰疹病毒（Herpes Simplex Virus I；HSV）9-10
• 1.1 簡介9
• 1.2 HSV-1 相關(guān)疾病9-10
• 1.3 臨床治療10
• 2. HSV-1 與細胞骨架10-14
• 2.1 HSV-1 生活周期10-11
• 2.2 HSV-1 胞內(nèi)運輸11-12
• 2.3 微管（MTs）12-14
• 3. 組蛋白去乙�；� 6（HDAC6）14-17
• 3.1 HDAC6 與腫瘤15-16
• 3.2 HDAC6 與病毒16-17
• 4. 研究意義17-19
• 第二部分 實驗方法與材料19-43
• 1. 實驗材料19-27
• 1.1 細胞系與病毒株19
• 1.2 儀器與耗材19-21
• 1.3 實驗試劑及試劑盒21-25
• 1.4 試劑配方25-27
• 2. 實驗方法27-43
• 2.1 細胞培養(yǎng)27-30
• 2.2 病毒擴增及滴度測定30-31
• 2.3 抑制劑對細胞的毒性實驗31-32
• 2.4 病毒空斑實驗32
• 2.5 質(zhì)粒轉(zhuǎn)化及抽提32-35
• 2.6 干擾RNA或質(zhì)粒轉(zhuǎn)染到細胞35
• 2.7 實時熒光定量PCR35-37
• 2.8 蛋白質(zhì)免疫印跡法37-41
• 2.9 免疫共沉淀41
• 2.10 免疫熒光實驗41-43
• 第三部分 實驗結(jié)果43-59
• 1. HSV-1 感染抑制HDAC6 的脫乙酰化酶活性43-45
• 2. HDAC6 抑制劑預(yù)處理增強HSV-1 的感染能力45-49
• 3. siRNA干擾HDAC6 促進HSV-1 感染49-50
• 4. 過表達HDAC6 可抑制HSV-1 感染50-52
• 5. HDAC6 活性的調(diào)控52-54
• 6. 病毒間層蛋白VP22 參與調(diào)控HSV-1 的入核運輸54-56
• 7. HDAC6 不通過泛素-蛋白酶體途徑降解56-57
• 8. 結(jié)論57-59
• 第四部分 討論與展望59-64
• 1. HDAC6 抑制 HSV-1 的入核運輸59-60
• 2. HSV-1 感染過程中 HDAC6 的活性調(diào)控60-61
• 3. 展望61-64
• 參考文獻64-73
• 附錄73-75
• 在校期間發(fā)表論文75-76
• 致謝76

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 ;Functional analysis of transcriptional regulation of herpes simplex virus type 1 tegument protein VP22[J];Science in China(Series C:Life Sciences);2008年11期

  本文關(guān)鍵詞：組蛋白脫乙�；�6抑制單純皰疹病毒Ⅰ型的入核運輸，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

，

本文編號：260410