【摘要】：目的:以p MSCV-puro載體(MGP)為骨架,構建帶有綠色熒光蛋白(green fluorescent protein,GFP)的小鼠micro RNA-31(mi R-31)反轉(zhuǎn)錄病毒載體MGP-31。方法:PCR擴增帶有NotⅠ以及XhoⅠ酶切位點的mi R31的前體(premi R-31)序列,然后克隆至MGP載體上,測序鑒定。將構建的MGP-31質(zhì)粒轉(zhuǎn)染HEK-293T細胞,通過熒光顯微鏡觀察GFP的表達情況,實時定量PCR檢測mi R-31轉(zhuǎn)錄水平以評估MGP-31質(zhì)粒的轉(zhuǎn)染效率。結果:基因序列分析顯示pre-mi R-31基因序列正確,并成功插入MGP載體,轉(zhuǎn)染HEK-293T細胞可表達GFP,實時定量PCR結果表明轉(zhuǎn)染MGP-31質(zhì)粒的HEK-293T細胞可高表達mi R-31。結論:MGP-31反轉(zhuǎn)錄病毒載體構建成功。

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本文編號：2567526