【摘要】：i TRAQTM是2004年美國(guó)應(yīng)用生物系統(tǒng)公司(Applied Biosystems Incorporation,ABI)最新推出的一種多肽體外標(biāo)記試劑,該技術(shù)可對(duì)復(fù)雜樣本、細(xì)胞器、細(xì)胞裂解液等樣本進(jìn)行相對(duì)和絕對(duì)定量研究,具有較好的定量效果、較高的重復(fù)性,并且彌補(bǔ)了DIGE及ICAT的不足,正迅速被廣大學(xué)者所接受。主要從i TRAQ實(shí)驗(yàn)原理、實(shí)驗(yàn)流程、i TRAQ與其他定量蛋白質(zhì)組學(xué)方法的比較等3個(gè)方面進(jìn)行簡(jiǎn)要總結(jié)。
【圖文】：

殺�。垛g詿針?質(zhì)譜檢測(cè)的時(shí)候，同重元素標(biāo)記肽段部分裂解，標(biāo)記蛋白則被分解為報(bào)告部分、平衡部分和氨基酸部分。報(bào)告部分在MS/MS圖上表現(xiàn)為診斷離子(diagnosticions)質(zhì)荷比在114～117或113～121之間。串聯(lián)質(zhì)譜檢測(cè)的診斷離子量的比值，代表了不同iTＲAQ試劑標(biāo)記的不同樣品之間的同一蛋白質(zhì)量的變化。iTＲAQ優(yōu)點(diǎn)是能夠標(biāo)記沒(méi)有CyDye染料標(biāo)記位點(diǎn)的肽段，iTＲAQ唯一的缺點(diǎn)是樣品需要先用胰酶(tryptic)消化裂解。這樣可能在樣品處理時(shí)會(huì)出現(xiàn)誤差。因此，保證iTＲAQ前期樣品處理?xiàng)l件的一致性很重要，見(jiàn)圖1、插頁(yè)Ⅲ圖2。圖14種同位素標(biāo)簽的iTＲAQ試劑結(jié)構(gòu)及機(jī)理示意圖2iTＲAQ實(shí)驗(yàn)流程實(shí)驗(yàn)流程主要是:樣本還原、變性、半胱氨酸封閉;胰蛋白酶消化蛋白;消化蛋白的iTＲAQ試劑標(biāo)記;標(biāo)記蛋白的混合;LC－MS/MS質(zhì)譜檢測(cè)及分析［4］。利用還原劑［磷酸3(2－氯乙基)酯，tris－(2－carboxyethyl)phosphine，TCEP］對(duì)樣本蛋白質(zhì)還原并用半胱氨酸封閉劑封閉，加入胰蛋白酶消化蛋白后用iTＲAQ試劑標(biāo)記，充分標(biāo)記后的蛋白質(zhì)樣品用強(qiáng)陽(yáng)離子交換色譜柱純化;用QSTAＲ屮XL及QTＲAP屮質(zhì)譜儀檢測(cè)后用ProQUANT軟件分析。也可用4700蛋白質(zhì)分析系統(tǒng)檢測(cè)后用GPSExplorerTM3．0軟件分析。分析結(jié)果可直接從Celera識(shí)別系統(tǒng)獲得蛋白質(zhì)功能、生物學(xué)特性及其他生物信息，也可以與相關(guān)的基因數(shù)據(jù)庫(kù)連接。最近Shadforth等開(kāi)發(fā)了i－Tracker軟件，，可以通過(guò)noncentroided串聯(lián)質(zhì)譜峰列表中提取離子峰報(bào)告率，并可以很容易與Mascot及Sequest蛋白質(zhì)鑒定工具連接［5］。3iTＲAQ多重化學(xué)標(biāo)記串聯(lián)質(zhì)譜技術(shù)與其他定量蛋白質(zhì)組學(xué)方法的比較［6］3．1雙向凝膠電泳(2－DE)雖然蛋白組學(xué)概念僅近幾年出現(xiàn)，但其雙向凝膠電泳技術(shù)可以追溯到1975年。2－DE技術(shù)由O’Farre

嗌鄡狀針

本文編號(hào)：2555581