【摘要】：目的采用卵白蛋白(OVA)致敏霧化吸入激發(fā)復(fù)制實(shí)驗(yàn)兔哮喘模型,用白毛黑眼兔(WHBE兔)與日本大耳白兔比較,探討WHBE兔對OVA刺激的敏感性和相關(guān)基因在哮喘模型中的表達(dá)變化,豐富哮喘疾病模型,為建立與環(huán)境因素相關(guān)的疾病模型和制備抗體的應(yīng)用研究,進(jìn)而有利于中醫(yī)藥研究哮喘的發(fā)病機(jī)制和防治提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 方法(1)實(shí)驗(yàn)兔哮喘模型的建立及其評價：取體重為1.6-2.0kg的雄性WHBE兔和JW兔各24只,按體重隨機(jī)各分為兩組：正常組8只和模型組16只。模型組于第1天、第8天腹腔和皮下注射2mL致敏液(含4mg OVA,200mg氫氧化鋁),第15天開始霧化吸入1%OVA激發(fā),模型霧化3d組連續(xù)霧化3d,即第18天處死。模型霧化7d組連續(xù)霧化7d,即第22天處死。正常組以生理鹽水按照相同的方法處理。每天觀察實(shí)驗(yàn)兔的生理狀況,采用酶聯(lián)免疫吸附測定法檢測血清中IgE、 IL-4和IFN-y的含量,進(jìn)行支氣管肺泡灌洗液白細(xì)胞計數(shù),計算嗜酸性粒細(xì)胞百分率,取右側(cè)肺組織進(jìn)行病理切片HE染色觀察；(2)實(shí)驗(yàn)兔哮喘模型中基因的表達(dá)研究：取上述各組實(shí)驗(yàn)兔右側(cè)肺組織提取RNA,采用Real-time PCR法檢測組織中TNF-α、 BAFF、 BAFFR和Bcl-2基因mRNA的表達(dá)水平。 結(jié)果(1)正常組實(shí)驗(yàn)兔無明顯異常情況；與正常組相比,模型組實(shí)驗(yàn)兔均出現(xiàn)呼吸急促等類似哮喘表現(xiàn),肺病理顯示支氣管周圍有較多炎癥細(xì)胞浸潤,以嗜酸性粒細(xì)胞浸潤為主,符合哮喘癥狀的表現(xiàn)；且模型組后期肺病理損傷更為明顯；(2)與正常組相比,WHBE兔和JW兔模型組在霧化3d和霧化7d時的支氣管肺泡灌洗液中白細(xì)胞總數(shù)和嗜酸性粒細(xì)胞百分率均明顯增多(P0.01)；但模型組霧化3d的嗜酸性粒細(xì)胞百分率比模型組霧化7d略高；(3)與正常組比,霧化3d后WHBE兔模型組IFN-y含量明顯下降(P0.05),且IgE、 IL-4水平略有上升,而JW兔模型組則變化不明顯；繼續(xù)霧化至7d后,WHBE兔和JW兔模型組IgE、 IL-4水平明顯升高(P0.05,P0.01),且IFN-γ含量顯著降低(P0.05,P0.01)；另外,霧化3d后WHBE兔模型組IFN-γ/IL-4比值明顯低于正常組(P0.05),而JW兔模型組IFN-γ/IL-4比值則降低不明顯；繼續(xù)霧化7d時,WHBE兔和JW兔模型組IFN-γ/IL-4比值均顯著降低(P0.05,P0.01)；與JW兔組比較,WHBE兔模型組IFN-γ/IL-4比值降低程度均高于同一時期的JW兔,但差異不顯著；(4)與正常組相比,WHBE兔和JW兔模型組霧化3d的TNF-α、BAFF、 BAFFR基因相對表達(dá)量與正常組相比無明顯變化；模型組霧化7d時,TNF-α、BAFF、 BAFFR和Bcl-2基因的相對表達(dá)量均明顯升高(P0.05,P0.01)；與JW兔相比,WHBE兔模型組霧化7d的TNF-α和Bcl-2基因表達(dá)略有增加,BAFFR基因相對表達(dá)量顯著高于JW兔(P0.01);(5)Pearson R相關(guān)分析顯示,哮喘模型WHBE兔IgE與肺泡BALF中的白細(xì)胞總數(shù)、BAFF mRNA、 BAFFR mRNA、Bcl-2mRNA均呈顯著正相關(guān)(P0.05),與IFN-γ呈顯著負(fù)相關(guān)(P0.05)；且BAFFR的基因表達(dá)與肺泡BALF中的白細(xì)胞總數(shù)、IgE、 IL-4、 BAFF mRNA、 TNF-α mRNA、 Bcl-2mRNA均呈顯著正相關(guān)(P001),而與IFN-γ、 IFN-γ/IL-4比值呈顯著負(fù)相關(guān)(P0.01),而JW兔的BAFFR的基因表達(dá)與BALF中的白細(xì)胞總數(shù)、BAFF mRNA、 TNF-α mRNA、 Bcl-2mRNA呈顯著正相關(guān)(P0.01)；與IFN-γ、 IFN-γ/IL-4比值呈顯著負(fù)相關(guān)(P0.05). 結(jié)論WHBE兔與日本大耳白兔相比,第1天、第8天腹腔和皮下注射2mL致敏液(含4mgOVA,200mg氫氧化鋁),第15天開始霧化吸入1%OVA激發(fā)一周誘導(dǎo)的WHBE兔哮喘模型具有病程快且癥狀明顯、穩(wěn)定的特點(diǎn),表明WHBE兔對OVA誘導(dǎo)較敏感,可用于建立哮喘模型。WHBE兔哮喘模型發(fā)生IFN-γ/IL-4比值降低比日本大耳白兔早而顯著,提示Th1/Th2的失衡為WHBE兔哮喘氣道炎癥形成的重要原因之一,表明WHBE兔哮喘模型的發(fā)病機(jī)制與臨床相符合；BAFFR和TNF-α在WHBE兔哮喘模型中出現(xiàn)高表達(dá),且BAFFR與WHBE兔IFN-γ、 IL-4顯著相關(guān),提示BAFFR和TNF-α表達(dá)異�？赡苁荗VA誘導(dǎo)WHBE兔哮喘模型嚴(yán)重程度區(qū)別于JW兔的關(guān)鍵因子。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：浙江中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2012
【分類號】：R256.12;R-332

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：2387514