【摘要】：目的： 通過優(yōu)化細(xì)胞因子誘導(dǎo)的殺傷細(xì)胞(Cytokine-induced killer cells, CIK細(xì)胞)的培養(yǎng)體系,提高CIK細(xì)胞的增殖能力和分泌細(xì)胞因子的能力,進(jìn)而增強(qiáng)CIK細(xì)胞效應(yīng)細(xì)胞的殺傷能力,改善治療腫瘤的效果。 方法： 選取2011年8月至2012年1月在鄭州大學(xué)一附院行生物治療的腫瘤患者外周血32人份,提取外周血單個(gè)核細(xì)胞,用RPMI1640培養(yǎng)基重懸后平均分為四組,按照CIK細(xì)胞培養(yǎng)流程進(jìn)行培養(yǎng),第0d在第一組中添加N-乙酰-D-乳糖胺(N-acetyl-D-lactosamine, LacNAc),第二組中添加LacNAc和抗-CD28單克隆抗體(抗-CD28mAb),第三組中添加抗-CD28mAb,第四組中添加等量的雙蒸水。在培養(yǎng)過程中分別在第4、8、10、12、14d用細(xì)胞計(jì)數(shù)法測定細(xì)胞增殖,在第7d用CFSE染色測定細(xì)胞增殖,在培養(yǎng)至12d從各組細(xì)胞中分別取1×106個(gè)細(xì)胞,檢測其分泌細(xì)胞因子IL-2、IL-10、IFN-γ以及TNF-α的能力,培養(yǎng)14d后檢測CIK細(xì)胞的細(xì)胞表型以及CIK細(xì)胞對(duì)靶細(xì)胞K562的殺傷能力。 結(jié)果： (1)各組中CIK細(xì)胞形態(tài)變化及增殖：在培養(yǎng)過程中在倒置顯微鏡(4×20)下觀察細(xì)胞形態(tài),細(xì)胞體積逐漸變大,細(xì)胞漿越來越豐富,細(xì)胞核逐漸增大。第2-4d細(xì)胞開始聚集,成簇狀克隆樣生長,在鏡下觀察不到各組之間細(xì)胞形態(tài)的差異,在細(xì)胞計(jì)數(shù)的每個(gè)時(shí)間點(diǎn)LacNAc組、LacNAc聯(lián)合抗-CD28mAb組以及抗-CD28mAb組CIK細(xì)胞增殖的速度較對(duì)照組快,且具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=3.945,P0.05；F=2.341,P0.05；F=72.121,P0.05；F=121.118,P0.05；F=32.973,P0.05)。 (2)各組間分泌細(xì)胞因子的量：LacNAc組、LacNAc聯(lián)合抗-CD28mAb組以及抗-CD28mAb組分泌細(xì)胞因子IL-2、IFN-γ、TNF-α的分泌量均較對(duì)照組高,且差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=5.87,P0.05；F=4.79,P0.05；F=5.2,P0.05),而前三組之間兩兩進(jìn)行比較沒有明顯差異(P0.05)。 (3)各組之間各種細(xì)胞所占比率：各組之間進(jìn)行比較發(fā)現(xiàn)LacNAc組、LacNAc聯(lián)合抗-CD28mAb組以及抗-CD28mAb組的CD8+細(xì)胞所占比例較對(duì)照組的高,且差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=5.03,P0.05),前三組中CD4+T淋巴細(xì)胞所占比率較對(duì)照組的低,且差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=4.63,P0.05),而LacNAc聯(lián)合抗-CD28niAb組中CD8+/CD4+的比值較對(duì)照組高,且差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=5.72,P0.05),而LacNAc組和抗-CD28mAb組與對(duì)照組CD8+/CD4+的比值比較無明顯差異(P0.05)。各組之間CD3+CD56+細(xì)胞所占比率差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。 (4)各組間對(duì)靶細(xì)胞K562的殺傷效能：對(duì)照組效應(yīng)細(xì)胞對(duì)靶細(xì)胞K562的殺傷率較LacNAc組、LacNAc聯(lián)合抗-CD28mAb組、抗-CD28mAb低,且差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=6.68,P0.05)。而LacNAc組、LacNAc聯(lián)合抗-CD28mAb組以及抗-CD28mAb組三組之間兩兩比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05) 結(jié)論： (1) LacNAc和抗-CD28mAb(?)有效提高CIK細(xì)胞群的增殖速度,LacNAc f口抗-CD28mAb均對(duì)CD8+T淋巴細(xì)胞具有促進(jìn)擴(kuò)增的效果,而對(duì)CD4+T細(xì)胞的效果不明顯； (2) LacNAc和抗-CD28mAb可以促進(jìn)CIK細(xì)胞分泌IL-2、IFN-γ及TNF-α等細(xì)胞因子,且LacNAc和抗-CD28mAb的這種促進(jìn)作用具有協(xié)同效應(yīng)； (3) LacNAc和抗-CD28mAb提高了CIK細(xì)胞對(duì)白血病細(xì)胞系K562的殺傷能力。新的培養(yǎng)體系優(yōu)于原來的培養(yǎng)體系。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：鄭州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2012
【分類號(hào)】：R363

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2293445