【摘要】：目的建立適用于肺炎支原體(mycoplasma pneumoniae,MP)的雙向電泳技術。方法對雙向電泳實驗中的三個關鍵因素:全蛋白提取量、固相PH梯度膠條范圍、蛋白上樣量進行摸索,比較和分析標準株FH電泳圖譜,利用液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜技術(LC-MS/MS)鑒定部分蛋白斑點。結果采用菌液離心結合超聲破碎的方法提取全蛋白,上樣量為2mg,固相PH梯度膠條選取PH4-7,可以得到蛋白點分布均勻的雙向電泳圖譜,蛋白點數(shù)為60±2。利用液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜(LC-MS/MS)技術成功獲得了分子伴侶蛋白(Chaperone protein DnaK),鑒定成功率為100%。結論成功建立了適用于肺炎支原體蛋白質(zhì)組分析的雙向電泳技術條件,為肺炎支原體蛋白質(zhì)組學的研究提供一個可靠的技術平臺。
[Abstract]:OBJECTIVE To establish a two-dimensional electrophoresis technique for Mycoplasma pneumoniae (MP). Methods Three key factors in the two-dimensional electrophoresis experiment were explored, including the total protein extraction, the range of solid phase PH gradient strips and the sample size on the protein. The electrophoretic patterns of FH of the standard strain were compared and analyzed, and identified by liquid chromatography-tandem mass spectrometry (LC-MS/MS). Results The whole protein was extracted by centrifugation and ultrasonic fragmentation. The sample size was 2 mg, and the solid phase PH gradient strip was PH4-7. The two-dimensional electrophoresis pattern with uniform distribution of protein spots was obtained. The number of protein spots was 60. The chaperone protein (Chaper) was successfully obtained by liquid chromatography-mass spectrometry (LC-MS/MS). CONCLUSION A two-dimensional electrophoresis technique suitable for the proteomic analysis of Mycoplasma pneumoniae has been successfully established, which provides a reliable technical platform for the study of Mycoplasma pneumoniae proteomics.
【作者單位】： 軍事醫(yī)學科學院附屬醫(yī)院呼吸與危重癥醫(yī)學科;軍事醫(yī)學科學院疾病預防控制所;
【基金】：首都特色基金(Z141107002514182) 國家自然科學基金(81400009)
【分類號】：R375.2

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本文編號：2250351