發(fā)布時(shí)間：2018-05-15 11:17

  本文選題：星形膠質(zhì)細(xì)胞 + 高糖　； 參考：《遼寧醫(yī)學(xué)院》2012年碩士論文

【摘要】：目的 探討高糖對(duì)高鉀刺激引起大鼠星形膠質(zhì)細(xì)胞外液谷氨酸含量的影響。 方法 從新生(1d~3d)的SD大鼠的大腦皮質(zhì)上提取星形膠質(zhì)細(xì)胞（Astrocytes，AST），傳代培養(yǎng)3~4代，并以膠質(zhì)酸性纖維蛋白（Glial fibrillary acidic protein，GFAP）免疫熒光法對(duì)所獲的細(xì)胞進(jìn)行鑒定。然后隨機(jī)分組：分別用不同濃度的葡萄糖細(xì)胞外液孵育膠質(zhì)細(xì)胞，其濃度分別為5、10、20和40mmol·L~(-1)；然后在此基礎(chǔ)上，加入氯化鉀75mmol·L~(-1)，而葡萄糖的濃度沒(méi)有變化，，和之前的保持一致，于0、1、2、3、4和5min后分別取細(xì)胞培養(yǎng)液測(cè)定谷氨酸（Glutamate，Glu）的含量。采用倒置顯微鏡觀察膠質(zhì)細(xì)胞的形態(tài)學(xué)變化；噻唑藍(lán)（MTT）法測(cè)定膠質(zhì)細(xì)胞的存活率；利用柱前鄰苯二甲醛（OPA）和N-異丁�；�-D-半胱氨酸(IBDC)衍生高效液相色譜法測(cè)定細(xì)胞培養(yǎng)液中Glu的含量。 結(jié)果 經(jīng)過(guò)免疫組化鑒定本試驗(yàn)培養(yǎng)的星形膠質(zhì)細(xì)胞（AST）的純度為95%以上。對(duì)培養(yǎng)的AST的細(xì)胞外液中的Glu含量進(jìn)行了測(cè)定。并對(duì)Glu含量的測(cè)定方法進(jìn)行了方法學(xué)研究，Glu濃度在12.5～200μg·L~(-1)范圍內(nèi)線性關(guān)系良好（r=0.9959）；峰面積的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)差為0.79%；平均回收率為98.5%，表明此Glu檢測(cè)方法可靠。 利用該方法測(cè)定了細(xì)胞外培養(yǎng)液中的Glu含量，結(jié)果發(fā)現(xiàn)用含有不同濃度葡萄糖的細(xì)胞外液孵育膠質(zhì)細(xì)胞0，1和3h后，細(xì)胞培養(yǎng)液中Glu含量無(wú)明顯變化，同時(shí)用MTT法測(cè)定了孵育3h后細(xì)胞的存活率，也無(wú)明顯變化；高濃度的氯化鉀（75mmol·L~(-1)）孵育1、2、3、4、5min后，含10、20和40mmol·L~(-1)葡萄糖的細(xì)胞培養(yǎng)液內(nèi)Glu含量比含5mmol·L~(-1)葡萄糖均明顯升高（P0.01）；但各組反應(yīng)并不一致。甘露醇組Glu含量變化與5mmol·L~(-1)葡萄糖組相似。結(jié)論高糖可能通過(guò)促進(jìn)星形膠質(zhì)細(xì)胞(AST)谷氨酸釋放及抑制吸收來(lái)影響細(xì)胞外液中的谷氨酸含量。從而提高細(xì)胞外液內(nèi)的谷氨酸的含量。
[Abstract]:Purpose To investigate the effect of high glucose on the content of glutamate in extracellular fluid of astrocytes induced by high potassium stimulation in rats. Method Astrocytes were isolated from the cerebral cortex of SD rats and cultured for 3 ~ 4 generations. The cells were identified by immunofluorescence method. Then, the glial cells were incubated with different concentrations of glucose extracellular solution at concentrations of 5 ~ 10 ~ (10) ~ (20) and 40mmol ~ (-1) ~ (-1) respectively. Then, potassium chloride (75mmol) was added to the solution, and glucose concentration was not changed, which was the same as before. The content of glutamate Glutamate Glu4 was measured in the culture medium after 0 ~ 1 and 2 ~ (2) ~ (2) ~ (2) ~ (3) ~ (3) ~ (3) and 5min, respectively. The morphological changes of glial cells were observed by inverted microscope, and the survival rate of glial cells was determined by thiazolyl methacrylate (MTT) method. The content of Glu in cell culture medium was determined by high performance liquid chromatography with precolumn phthalaldehyde (OPA) and N- isobutylol-D- cysteine (IBDC) derivatives. Result The purity of cultured astrocytes was over 95% by immunohistochemistry. The content of Glu in extracellular fluid of cultured AST was determined. The method for the determination of Glu content was studied. The linear range of Glu concentration was 12.5 渭 g / L ~ (-1). The relative standard deviation of peak area was 0.79 and the average recovery was 98.5%, which indicated that the method was reliable for the determination of Glu in the range of 12.5 渭 g / L ~ (-1), and the relative standard deviation of peak area was 0.79% and the average recovery was 98.5 渭 g / L ~ (-1), respectively. The Glu content in the extracellular culture medium was determined by this method. The results showed that the Glu content in the cell culture medium did not change significantly after incubating glial cells with different concentrations of glucose for 0 and 3 hours. At the same time, MTT assay was used to determine the survival rate of the cells incubated for 3 h, and the survival rate of the cells was not significantly changed after incubation with high concentration of KCl (75mmol / L) for 5 minutes. The content of Glu in the cell culture medium containing 10 ~ (20) and 40mmol L ~ (1) glucose was significantly higher than that in the medium containing 5mmol L ~ (1), but the response was not consistent among the three groups. The change of Glu content in mannitol group was similar to that in 5mmol Ln-1) glucose group. Conclusion High glucose may affect the content of glutamate in extracellular fluid by promoting the release of glutamate from astrocytes and inhibiting its absorption. In order to increase the content of glutamate in extracellular fluid.
【學(xué)位授予單位】：遼寧醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2012
【分類(lèi)號(hào)】：R341

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本文編號(hào)：1892226