本文選題：血管緊張素Ⅱ + 樹突狀細胞��； 參考：《浙江大學》2012年博士論文

【摘要】：研究背景： 樹突狀細胞(DC)和自然殺傷(NK)細胞是機體兩大類免疫細胞,與其它免疫細胞共同構(gòu)成血管相關(guān)淋巴組織。DC-NK通過相互作用能加強雙方的功能,產(chǎn)生大量的細胞因子促進免疫炎癥反應(yīng)。 白介素-23(IL-23)是近年來發(fā)現(xiàn)的IL-12家族新成員,相關(guān)的文獻研究證明,IL-23參與了動脈粥樣硬化的病理生理過程。但是沒有相關(guān)研究證明DC-NK交互作用是否能產(chǎn)生IL-23。AngⅡ是動脈粥樣硬化的危險因素之一,AngⅡ在DC-NK交互作用中的作用亦無相關(guān)研究。 目的： 本研究主要探索DC-NK交互作用中IL-23產(chǎn)生及其可能的分子機制,并探討了AngⅡ?qū)C-NK交互作用中IL-23產(chǎn)生的影響與可能機制。 方法： 1)從6-8周齡C57/BL6小鼠的骨髓股骨及脛骨獲得骨髓單個核細胞,體外培養(yǎng)誘導分化為DC。 2)培養(yǎng)DC6天后,摘取10-12周C57/BL6小鼠的脾臟,獲得脾臟單個細胞,用免疫磁珠分選NK細胞。按照2：1的DC/NK細胞比例,將DC與新鮮分離的NK共培養(yǎng)。 3)根據(jù)實驗分組加入或不加AngⅡ,24小時后留取細胞培養(yǎng)上清,用ELISA檢測IL-23產(chǎn)量；用流式細胞儀檢測DC成熟表型；或用免疫磁珠將DC與NK分離開,用Western blot檢測extracellular signal-regulated kinase (ERK1/2), stress-activated protein kinase/c-Jun N-terminal kinase (JNK)和P38MAPK的磷酸化水平。 4)根據(jù)ERK, JNK, P38MAPK活化的情況,在DC里分別預先加入PD98059(ERKl/2inhibitor,50μM), SB-203580(p38MAPK inhibitor,10μM)或SP600125(JNK1/2/3inhibitor,10μM),再與NK和/或AngⅡ培養(yǎng)24小時,檢測培養(yǎng)上清中IL-23的含量。 結(jié)果： 1) NK細胞能促進DC分泌IL-23,Ang Ⅱ也能促進DC分泌IL-23,但是在DC-NK共培養(yǎng)體系中加入Ang Ⅱ后,IL-23的水平反而有所下降。 2)DC-NK交互作用使DC成熟的表面分子標志表達升高,但AngⅡ?qū)C-NK交互作用中的DC成熟狀態(tài)無顯著影響。 3) AngⅡ通過磷酸化ERK1/2使DC產(chǎn)生IL-23；NK通過ERK、JNK、P38MAPK途徑使DC產(chǎn)生IL-23；但在DC-NK共培養(yǎng)體系中,JNK通路對IL-23的產(chǎn)生起重要作用。 結(jié)論： 1)DC-NK交互作用可以產(chǎn)生IL-23。 2) AngⅡ能促進DC產(chǎn)生IL-23,但卻減少了DC-NK交互作用中IL-23的產(chǎn)量。 3)不同的MAPK通路參與調(diào)節(jié)了DC的IL-23產(chǎn)生。 背景： 氧化低密度脂蛋白(oxLDL)在動脈粥樣硬化進展中有重要推動作用。既往的研究發(fā)現(xiàn)氧化低密度脂蛋白能刺激樹突狀細胞(DC)啟動一系列免疫應(yīng)。MicroRNA是一類非編碼小片段RNA,其功能主要是通過與靶基因的mRNA (messenger RNA)的3’非翻譯區(qū)(3’UTR)特異相互作用負向調(diào)控mRNA的翻譯,進而影響細胞分化發(fā)育、免疫以及炎癥等生理病理過程。對于oxLDL刺激樹突狀細胞所引起的MicroRNA的變化在國內(nèi)外研究較少。 本課題組繼往研究發(fā)現(xiàn),oxLDL刺激的人外周血來源DC高表達microRNA-29a(miR-29a)。miR-29a是一個被廣泛研究的(?)niRNA,它的作用多樣而復雜,參與調(diào)節(jié)許多病理與生理過程。高表達的miR-29a對DC功能有怎樣的影響,是否參與oxLDL的致病過程,值得探討。 目的： 利用oxLDL刺激人外周血來源DC,觀察miR-29a對DC的細胞因子IL-12以及趨化因子分泌的影響,并對miR-29a的靶標基因進行驗證。 方法： 體外培養(yǎng)誘導分化人外周血來源的DC,分別用miR-29a的模擬物和抑制劑轉(zhuǎn)染DC,然后加入oxLDL培養(yǎng)DC48小時后,檢測培養(yǎng)上清趨化因子CCL3和CCL5的表達。分別用熒光定量PCR和蛋白印跡檢測靶標基因HSPA14的表達,并用螢火蟲素酶報告基因檢測驗證HSPA14的3’-UTR與miR-29a直接結(jié)合。HSPA14的RNA干擾驗證了miR-29a對DC細胞因子及趨化因子分泌的負性調(diào)控作用。 結(jié)果： miR-29a能降低oxLDL刺激的DC表達細胞因子IL-12和趨化因子CCL3、CCL5。熒光定量PCR以及Western-blot證明miR-29a減少了HSPA14的表達。螢火蟲素酶報告基因檢測驗證HSPA14是miR-29a的靶基因。 結(jié)論： miR-29a通過抑制靶基因HSPA14來減少oxLDL刺激的DC分泌細胞因子IL-12和趨化因子CCL3、CCL5。
[Abstract]:Research background:
Dendritic cells (DC) and natural killer (NK) cells are two major immune cells in the body, which together form vascular related lymphoid tissue with other immune cells to enhance the function of both sides through interaction and produce a large number of cytokines to promote immune inflammatory response.
Interleukin -23 (IL-23) is a new member of the IL-12 family found in recent years. Related literature studies have shown that IL-23 has been involved in the pathophysiological process of atherosclerosis. However, there is no related research to prove whether DC-NK interaction can produce IL-23.Ang II is one of the risk factors for atherosclerosis, and the role of Ang II in DC-NK interaction There is no related research.
Objective:
This study mainly explores the molecular mechanism of IL-23 production and its possible mechanisms in the interaction of DC-NK, and probes into the effects and possible mechanisms of Ang II on the production of IL-23 in the interaction of DC-NK.
Method錛，

本文編號：1800863