本文關鍵詞：流式細胞術外周血淋巴細胞亞群分析標準化的部分調(diào)研　出處：《北京協(xié)和醫(yī)學院》2011年碩士論文　論文類型：學位論文

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【摘要】：[背景和目的] 流式細胞術(flow cytometry, FCM)淋巴細胞亞群分析是一項較新而操作復雜的技術,在實驗過程中,多種因素均可影響FCM的分析結果。發(fā)達國家流式細胞術起步早,發(fā)展快,其操作也很規(guī)范。美國疾病控制中心(Center for Disease Control and Prevention, CDC)、美國臨床和實驗室標準協(xié)會(Clinical and Laboratory Standard Institute, CLSI)在20世紀90年代出臺了FCM淋巴細胞亞群分析的標準化方案,此后隨著FCM儀器和試劑的不斷更新?lián)Q代,這些標準化方案也得到了進一步完善。我國目前FCM淋巴細胞亞群分析還沒有公認的標準化方案,國內(nèi)FCM分析在參考范圍、質(zhì)量控制、試劑和儀器選擇等方面仍然存在許多問題。 本研究旨在調(diào)研部分臨床實驗室FCM淋巴細胞亞群分析參考范圍應用的合理性、FCM室內(nèi)質(zhì)控品的使用及不同生產(chǎn)廠家的流式細胞儀和試劑組合對淋巴細胞亞群分析結果的影響,以期為建立FCM淋巴細胞亞群分析的標準化方案提供有力證據(jù)。 [對象和方法] 研究對象包括76例北京協(xié)和醫(yī)院門診及住院患者,50例北京協(xié)和醫(yī)院體檢中心健康體檢者。 根據(jù)國內(nèi)臨床實驗室常用的3個流式細胞儀型號(Beckman Coulter Epics XL、Beckman Coulter Cytomics FC500、BD FACS Calibur),分別選取3家北京地區(qū)臨床流式細胞室(A、B、C室),按照各室的實際檢測方案分別測定50份健康人靜脈血標本,以驗證各室淋巴細胞亞群分析參考范圍是否合理。調(diào)查3家實驗室室內(nèi)全血質(zhì)控品使用情況,并將商品化全血質(zhì)控品分發(fā)各室,按照各自的實際實驗方案在20個工作日內(nèi)與常規(guī)標本平行處理、檢測和分析。針對不同生產(chǎn)廠家的試劑,在同一流式細胞儀(型號為Beckman Coulter Epics XL)上用a、b、c、d4種不同的試劑組合對20份患者標本進行檢測,其中試劑組合a為美國BeckmanCoulter公司同廠配套試劑和儀器,試劑組合b、c、d的檢測結果分別與試劑組合a比較。采用相同試劑和溶血素(美國Beckman Coulter公司)對24份患者標本進行前處理,分別在2臺不同廠家和型號的流式細胞儀(型號為Beckman Coulter Epics XL和BD FACS Calibur)上檢測,比較相同試劑處理標本后不同儀器對淋巴細胞亞群分析結果的影響。采用同廠配套試劑和儀器,比較Beckman Coulter EpicsXL和BD FACS Calibur兩個流式細胞檢測系統(tǒng)對32份患者標本檢測結果的影響。 [研究結果] 1.A室的NK及T4/T8,B、C兩室的T4均有大于10%的結果落在相應的參考范圍之外,超出相應參考范圍的概率分別為16%(9/50)、24%(12/50)、22%(11/50)、12%(6/50)。 2.20個工作日內(nèi),A室的T3、T4、T8、NK細胞相對計數(shù),B、C 2家實驗室所有項目(T3、T4、T8、B、NK)的質(zhì)控結果均在控。A室的B淋巴細胞相對計數(shù)的20個工作日內(nèi)質(zhì)控結果出控率為15%(3/20)。 3.與試劑組合a比較,試劑組合b、c的所有項目偏倚均較大,其中偏倚10%的概率最低為試劑組合b的T8,為70%(14/20)；最高為試劑組合b、c的T3、T4,均達到100%(20/20)；試劑組合d的T3、T8和B偏倚較大,偏倚10%的概率分別為35%(7/20)、85%(17/20)、75%(15/20)。Bland-Altman—致性分析、平均相似百分率及相似百分率的CV分析顯示只有試劑組合d的T4、NK的一致性相對較好。 4.用相同試劑前處理標本,在不同儀器上分析標本的結果,與采用同一生產(chǎn)廠家的試劑和儀器處理和分析的結果相比,T3、T4、T8、B、NK均存在較大偏倚,偏倚10%的概率分別為58%(14/24)、79%(19/24)、38%(9/24)、33%(8/24)、92%(22/24)。Bland-Altman一致性分析顯示所有指標中T8、B細胞的平均偏倚相對較小,但T8的LOA較寬(-7.46～7.74)。平均相似百分率及相似百分率的CV比較顯示,所有指標僅T8、B細胞相對計數(shù)的平均相似百分率最接近100%,但兩者的相似百分率CV偏大,分別為7.12%,9.28%。 5. Beckman Coulter Epics XL和BD FACS Calibur兩個流式細胞檢測系統(tǒng)相比較,T4、T8、NK和B的偏倚均較大,偏倚10%的概率分別為34%(11/32),44%(14/32)、63%(20/32)、59%(19/32)。Bland-Altman一致性分析顯示僅T3的一致性相對較好。平均相似百分率及相似百分率的CV比較顯示,T3、T4相對計數(shù)的平均相似百分率最接近100%,但T3的相似百分率CV最小。[結論] 在FCM分析淋巴細胞亞群的參考范圍方面,每個實驗室或每個分析系統(tǒng)應該建立自己的參考范圍并定期驗證其參考范圍。質(zhì)控方面,流式細胞室應該定期進行全血質(zhì)控品檢查,并累計質(zhì)控數(shù)據(jù),建立自己的質(zhì)控范圍。如果質(zhì)控結果超出自己建立的質(zhì)控范圍,則需要優(yōu)化整個分析流程,包括標本的前處理、儀器的調(diào)試、數(shù)據(jù)的分析等。試劑和儀器方面,流式細胞室應選擇同廠配套試劑。此外,流式細胞室應加強工作人員的業(yè)務培訓和學術交流。這樣才能保證結果準確可靠,各室之間的分析結果具有可比性。
[Abstract]:......
【學位授予單位】：北京協(xié)和醫(yī)學院
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2011
【分類號】：R329

【參考文獻】

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本文編號：1355630