本文關(guān)鍵詞：胸膜肺炎放線桿菌三聚體自轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白1承載區(qū)的功能分析　出處：《吉林大學(xué)》2011年碩士論文　論文類(lèi)型：學(xué)位論文

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【摘要】：本研究利用生物信息學(xué)技術(shù),對(duì)APP自轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白Aad1 C末端進(jìn)行序列比對(duì)和結(jié)構(gòu)預(yù)測(cè),應(yīng)用DNA重組方法,構(gòu)建分泌型表達(dá)系統(tǒng),利用免疫印跡技術(shù),鑒定Aad1蛋白C末端在外膜中的表達(dá)情況,進(jìn)一步證明其C末端結(jié)構(gòu)特征,從而確定該未知蛋白屬于哪個(gè)蛋白質(zhì)家族。結(jié)果表明Aad1蛋白C末端序列與YadA和Hia的轉(zhuǎn)運(yùn)區(qū)域相比,序列上具有較高的同源性,預(yù)測(cè)的結(jié)構(gòu)上具有一定的相似性;在SDS變性條件下,目的蛋白的分子量大小約是預(yù)期的3倍,說(shuō)明Aad1蛋白C末端可以在細(xì)胞外膜表面形成穩(wěn)定的三聚體結(jié)構(gòu),進(jìn)一步證明Aad1蛋白是三聚體自轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白家族成員。為下一步研究其承載區(qū)域的黏附活性分析提供基礎(chǔ)。 將APP三聚體自轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白Aad1承載區(qū)域654-3255序列分為五段。利用生物學(xué)方法,將五個(gè)基因片段克隆入原核表達(dá)載體,在大腸桿菌中進(jìn)行表達(dá)、純化,最終獲得五個(gè)可溶性的重組蛋白,命名為GST- Aad1-2、GST- Aad1-3、GST- Aad1-4、GST- Aad1-5、GST- Aad1-6。應(yīng)用免疫熒光技術(shù)和黏附抑制試驗(yàn),對(duì)重組蛋白進(jìn)行功能驗(yàn)證,比較Aad1各段重組蛋白對(duì)豬肺上皮細(xì)胞的黏附能力。結(jié)果表明,GST- Aad1-2、GST- Aad1-4和GST- Aad1-3,即位于N端654~1157、1703~2018區(qū)域和1295~1567區(qū)域,可以介導(dǎo)APP對(duì)豬肺上皮細(xì)胞的黏附作用,且GST- Aad1-2和GST- Aad1-4黏附能力高于GST- Aad1-3。由此推測(cè),位于N端654~1157、1703~2018和1295~1567氨基酸殘基區(qū)域可能是三聚體自轉(zhuǎn)運(yùn)黏附素蛋白Aad1的功能區(qū),為揭示APP三聚體自轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白分子致病機(jī)理提供重要的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2011
【分類(lèi)號(hào)】：R378

【引證文獻(xiàn)】

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2 計(jì)群;自轉(zhuǎn)運(yùn)黏附素Apa1功能區(qū)與豬肺組織互作蛋白的篩選與序列分析[D];吉林大學(xué);2013年

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本文編號(hào)：1355186