本文關(guān)鍵詞：骨髓基質(zhì)細(xì)胞衰老對造血細(xì)胞衰老的影響

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【摘要】：目的探討骨髓基質(zhì)細(xì)胞(BMSCs)衰老對骨髓造血細(xì)胞衰老的影響及其可能的機(jī)制。方法貼壁培養(yǎng)大鼠骨髓基質(zhì)細(xì)胞,傳代BMSCs至P3代時分組。對照組:常規(guī)培養(yǎng);衰老組:常規(guī)培養(yǎng)基礎(chǔ)上加入D-半乳糖(D-Gal)誘導(dǎo)BMSCs衰老,兩組細(xì)胞分別培養(yǎng)48h。收集培養(yǎng)上清液,ELISA法檢測細(xì)胞因子:粒細(xì)胞巨噬細(xì)胞集落刺激因子(GM-CSF)、干細(xì)胞因子(SCF)、白細(xì)胞介素(IL)-6、IL-1β,IL-2和腫瘤壞死因子-α(TNF-α)含量,CCK-8檢測細(xì)胞增殖能力,衰老相關(guān)β-半乳糖苷酶(SA-β-Gal)染色檢測BMSCs衰老。分離提取正常骨髓單個核細(xì)胞(BMMNCs),在衰老組與對照組BMMSCs上種植正常BMMNCs共培養(yǎng)24h,收集上層懸浮BMMNCs。CCK-8法測定細(xì)胞增殖能力;多向造血祖細(xì)胞集落(CFU-Mix)半固體培養(yǎng)法檢測細(xì)胞增殖及分化能力;SA-β-Gal染色觀察衰老細(xì)胞百分率;流式細(xì)胞術(shù)分析細(xì)胞周期與細(xì)胞凋亡;DCFH-DA熒光染色檢測細(xì)胞活性氧簇(ROS)水平;酶學(xué)法檢測細(xì)胞內(nèi)丙二醛(MDA)含量和總超氧化物歧化酶(SOD)活性。結(jié)果衰老組BMSCs增殖能力顯著下降,SA-β-Gal染色陽性細(xì)胞百分率增加,細(xì)胞分泌GM-CSF、SCF、IL-6、IL-1β水平明顯降低,IL-2、TNF-α水平顯著升高。與衰老BMSCs共培養(yǎng)后,BMMNCs的增殖能力顯著下降,SA-β-Gal染色陽性細(xì)胞百分率顯著上升,BMMNCs形成CFUMix集落數(shù)量明顯降低,細(xì)胞周期呈現(xiàn)阻滯且細(xì)胞凋亡率上升,細(xì)胞內(nèi)ROS、MDA含量上升,SOD含量下降。結(jié)論本實(shí)驗(yàn)中D-Gal成功復(fù)制了BMSCs衰老,衰老的BMSCs可誘導(dǎo)骨髓造血細(xì)胞衰老,其機(jī)制可能與BMSCs導(dǎo)致造血細(xì)胞氧化損傷有關(guān)。
【作者單位】： 重慶醫(yī)科大學(xué)干細(xì)胞與組織工程學(xué)研究室組織學(xué)與胚胎學(xué)教研室;
【關(guān)鍵詞】： 骨髓造血細(xì)胞 骨髓基質(zhì)細(xì)胞 衰老生物學(xué) 酶聯(lián)免疫吸附測定法 大鼠
【基金】：國家自然科學(xué)基金(81173398,81673748) 重慶市科委基礎(chǔ)與前沿研究項(xiàng)目(cstc2014jcyjA 10001)
【分類號】：R329.2
【正文快照】： 造血誘導(dǎo)微環(huán)境[1](hematopoietic inductivemicroenvironment,HIM)是造血干細(xì)胞(hematopoietic stem cells,HSCs)賴以生存和增殖分化的場所,HIM不僅為HSCs的增殖分化提供生存支架,還通過產(chǎn)生多種造血調(diào)控因子影響細(xì)胞增殖分化的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路等多途徑調(diào)控HSCs功能[2]�，F(xiàn)代造

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3 徐R，

本文編號：1095250