重金屬鎘污染嚴重威脅著人們的生存環(huán)境以及身心健康,與傳統(tǒng)的物理、化學(xué)等修復(fù)技術(shù)相比,微生物因具有繁殖快、分布廣、適應(yīng)性和代謝能力強等優(yōu)勢,微生物修復(fù)技術(shù)備受廣大科研工作者青睞。課題組前期以湖南省多地鎘污染土壤的混合樣品為材料,從中選育出一株在固體培養(yǎng)基和液體培養(yǎng)基中能夠分別耐受50 mmol/L和45mmol/L Cd²⁺的鏈霉菌Streptomyces sp.strain Cd TB01,并對該菌的培養(yǎng)條件以及吸附Cd²⁺的條件進行了優(yōu)化,發(fā)現(xiàn)具有應(yīng)用于鎘污染環(huán)境治理的潛力。為了揭示鏈霉菌Streptomyces sp.strain Cd TB01的耐鎘作用機理,完成了該菌株的全基因組圖譜。本研究在此基礎(chǔ)之上,通過基因組序列分析、基因克隆、體外表達、定點突變以及功能驗證等方法挖掘Streptomyces sp.strain Cd TB01中的耐鎘功能相關(guān)基因。獲得如下主要研究結(jié)果:(1)通過克隆與測序分析從Streptomyces sp.strain Cd TB01中獲得兩個鎘脅迫應(yīng)答候選基因orf09544＿6358和orf11342＿7...

【文章頁數(shù)】：71 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
abstract
英文縮寫詞中英文對照表
1 文獻綜述
    1.1 重金屬鎘
    1.2 重金屬鎘污染
        1.2.1 鎘污染現(xiàn)狀
        1.2.2 鎘污染的特點
        1.2.3 鎘污染的危害
            1.2.3.1 鎘污染對植物的危害
            1.2.3.2 鎘污染對人體的危害
    1.3 鎘污染的治理
    1.4 微生物耐鎘作用機制
        1.4.1 阻止鎘的內(nèi)流
            1.4.1.1 菌體表面吸附
            1.4.1.2 胞外沉淀
            1.4.1.3 阻斷離子通道
        1.4.2 胞內(nèi)轉(zhuǎn)化
        1.4.3 外排作用
            1.4.3.1 P-type ATPase
            1.4.3.2 CDF家族
            1.4.3.3 CzcCBA轉(zhuǎn)運體
    1.5 研究的目的與意義
    1.6 技術(shù)路線
2 材料與方法
    2.1 試驗材料與試劑
        2.1.1 實驗材料
        2.1.2 化學(xué)試劑
        2.1.3 培養(yǎng)基
        2.1.4 常用儀器
    2.2 試驗方法
        2.2.1 目的基因的克隆
        2.2.2 生物信息學(xué)分析
        2.2.3 原核表達載體的構(gòu)建
        2.2.4 原核表達與耐鎘特性的鑒定
        2.2.5 定點飽和突變
3 結(jié)果與分析
    3.1 目的基因的克隆和序列分析
        3.1.1 目的基因的克隆
        3.1.2 序列分析
        3.1.3 進化樹分析
    3.2 原核表達載體構(gòu)建及耐鎘特性的分析
        3.2.1 pET30a(+)-6358、pET30a(+)-7483 載體載體構(gòu)建
        3.2.2 SDS-PAGE電泳
        3.2.3 耐鎘特性分析
    3.3 定點飽和突變
        3.3.1 突變位點選擇
        3.3.2 突變體載體構(gòu)建
        3.3.3 突變體耐鎘特性分析
4 討論
    4.1 CysK/M-6358初步鑒定為半胱氨酸合成酶CysK/M家族蛋白
    4.2 CorA-7483 初步鑒定為Mg/Co轉(zhuǎn)運子
    4.3 耐鎘鏈霉菌Streptomyces sp.strain CdTB01具有一定的應(yīng)用前景
5 結(jié)論、創(chuàng)新點及下一步實驗計劃
    5.1 結(jié)論
    5.2 創(chuàng)新點
    5.3 下一步實驗計劃
參考文獻
致謝
作者簡介



本文編號：3846838