隨著人類活動的增加,鎘(cadnium,Cd)污染已經(jīng)成為影響生態(tài)系統(tǒng)中生物代謝的全球性環(huán)境問題。Cd在人體中的半衰期約為20～30年,又因排泄緩慢易富集的特點,嚴(yán)重威脅人類健康。研究表明,Cd暴露導(dǎo)致細胞產(chǎn)生過量的活性氧(reactive oxygen species,ROS),增加的ROS與DNA損傷應(yīng)答系統(tǒng)相互作用,從而影響生物體基因組的穩(wěn)定性;同時損害了細胞原有的抗氧化防御能力,導(dǎo)致細胞產(chǎn)生氧化應(yīng)激。當(dāng)Cd誘導(dǎo)產(chǎn)生的損害超過細胞本身的修復(fù)能力時,就會激活信號傳導(dǎo)途徑啟動細胞凋亡。另外,Cd脅迫可導(dǎo)致表觀遺傳修飾發(fā)生改變,并調(diào)控相關(guān)基因的表達。本研究選用黑腹果蠅(Drosophila melanogaster)Canton-S品系三齡幼蟲為研究對象,在測定Cd對幼蟲半致死濃度(lethal concentration 50,LC50)的基礎(chǔ)上,進行氮藍四唑還原實驗測定活性氧含量,臺盼藍染色實驗及幼蟲爬行實驗分析中腸細胞損傷情況,并應(yīng)用彗星實驗技術(shù)檢測中腸細胞DNA損傷;Real-time quantitative PCR 技術(shù)檢測凋亡相關(guān)基因Debcl、hid、rpr、Diap1...

【文章頁數(shù)】：99 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
中英文縮寫詞表
第1章 前言
    1.1 重金屬鎘概述
    1.2 重金屬鎘毒性效應(yīng)及分子機制
        1.2.1 鎘的毒性效應(yīng)
        1.2.2 鎘毒性效應(yīng)的分子機制
        1.2.3 鎘對果蠅的毒性效應(yīng)研究進展
    1.3 黑腹果蠅——遺傳毒理學(xué)研究的模式生物
    1.4 果蠅細胞凋亡機制研究概述
    1.5 果蠅的表觀遺傳研究概述
    1.6 DNA甲基化檢測方法
    1.7 本研究的研究內(nèi)容、目的及技術(shù)路線
        1.7.1 研究內(nèi)容
        1.7.2 研究目的及意義
        1.7.3 技術(shù)路線
第2章 鎘脅迫果蠅幼蟲的半致死濃度LC₅₀的測定
    2.1 研究材料
        2.1.1 研究對象
        2.1.2 試劑
        2.1.3 儀器
    2.2 研究方法
        2.2.1 培養(yǎng)基的配制
        2.2.2 鎘濃度設(shè)置及果蠅處理方法
        2.2.3 數(shù)據(jù)統(tǒng)計與分析
    2.3 結(jié)果與分析
    2.4 討論
    2.5 小結(jié)
第3章 鎘脅迫對果蠅氧化應(yīng)激的影響
    3.1 研究材料
        3.1.1 研究對象
        3.1.2 試劑
        3.1.3 儀器
    3.2 研究方法
        3.2.1 氮藍四唑還原實驗
        3.2.2 臺盼藍染色實驗
        3.2.3 幼蟲爬行行為實驗
        3.2.4 測量結(jié)蛹高度
        3.2.5 果蠅表型觀察
        3.2.6 彗星實驗
        3.2.7 研究數(shù)據(jù)統(tǒng)計及分析
    3.3 結(jié)果與分析
        3.3.1 鎘脅迫對果蠅幼蟲ROS含量的影響
        3.3.2 鎘誘導(dǎo)果蠅幼蟲中腸細胞的損傷情況
        3.3.3 鎘對果蠅幼蟲的爬行行為的影響
        3.3.4 鎘對果蠅幼蟲結(jié)蛹高度的影響
        3.3.5 鎘脅迫對翅膀表型的影響
        3.3.6 鎘脅迫對果蠅幼蟲DNA損傷的影響
    3.4 討論
        3.4.1 鎘脅迫果蠅幼蟲體內(nèi)ROS含量增加
        3.4.2 鎘誘導(dǎo)果蠅幼蟲腸道細胞損傷
        3.4.3 鎘誘導(dǎo)果蠅幼蟲爬行行為異常
        3.4.4 鎘脅迫對果蠅結(jié)蛹高度無影響
        3.4.5 鎘脅迫成蠅翅膀表型變化
        3.4.6 鎘誘導(dǎo)果蠅幼蟲DNA損傷
    3.5 小結(jié)
第4章 鎘對果蠅幼蟲線粒體及細胞凋亡相關(guān)基因表達的影響
    4.1 研究材料
        4.1.1 研究對象
        4.1.2 試劑
        4.1.3 儀器
    4.2 研究方法
        4.2.1 幼蟲總RNA提取
        4.2.2 幼蟲總RNA質(zhì)量檢測
        4.2.3 反轉(zhuǎn)錄獲取cDNA
        4.2.4 引物設(shè)計
        4.2.5 Real-time quantitative PCR檢測
        4.2.6 研究數(shù)據(jù)統(tǒng)計及分析
    4.3 結(jié)果與分析
        4.3.1 總RNA電泳檢測
        4.3.2 線粒體基因的溶解曲線與擴增曲線
        4.3.3 鎘對果蠅幼蟲sesB、Ant2基因表達的影響
        4.3.4 鎘對果蠅幼蟲凋亡基因表達的影響
    4.4 討論
        4.4.1 鎘脅迫誘導(dǎo)果蠅腺嘌呤核苷酸轉(zhuǎn)位酶編碼基因sesB表達下調(diào)
        4.4.2 鎘脅迫誘導(dǎo)果蠅促凋亡基因Debcl表達上調(diào)
        4.4.3 鎘脅迫果蠅抑凋亡基因Diap1表達下調(diào)
        4.4.4 鎘脅迫果蠅促凋亡基因p53表達上調(diào)
        4.4.5 鎘脅迫果蠅Sce基因表達先上升后下降
    4.5 小結(jié)
第5章 鎘脅迫后果蠅Mekk1表達改變與DNA甲基化水平的相關(guān)性研究
    5.1 研究材料
        5.1.1 研究對象
        5.1.2 試劑
        5.1.3 儀器
    5.2 研究方法
        5.2.1 幼蟲總DNA、RNA提取
        5.2.2 DNA、RNA質(zhì)量檢測
        5.2.3 BSP實驗樣本處理
        5.2.4 引物設(shè)計
        5.2.5 Real-Time quantitative PCR檢測
        5.2.6 BSP甲基化PCR擴增體系
        5.2.7 研究數(shù)據(jù)統(tǒng)計及分析
    5.3 結(jié)果與分析
        5.3.1 應(yīng)激抗性基因的溶解曲線與擴增曲線
        5.3.2 鎘脅迫對果蠅幼蟲Mekk1和Cdc42基因表達的影響
        5.3.3 Mekk1基因的DNA甲基化檢測結(jié)果
        5.3.4 Mekk1基因表達與甲基化率的相關(guān)性分析
    5.4 討論
    5.5 小結(jié)
第6章 結(jié)論與展望
    6.1 結(jié)論
    6.2 展望
參考文獻
附錄
致謝
攻讀碩士學(xué)位期間科研成果



本文編號：3773662