【目的】珙桐Davidia involucrata有性生殖能力弱是限制其自然更新的主要原因。為研究珙桐種子發(fā)育的分子機(jī)制,本課題組前期完成了珙桐種子轉(zhuǎn)錄組分析,篩選到1個(gè)編號(hào)為c37849.graph_c0的轉(zhuǎn)錄本,其在正常種子中高量表達(dá),而在發(fā)育異常的種子中表達(dá)量很低,差異表達(dá)顯著,因此將其作為研究目標(biāo)。【方法】使用PCR克隆該轉(zhuǎn)錄本的全長(zhǎng)序列,并利用在線分析工具對(duì)其編碼氨基酸的序列特征、蛋白結(jié)構(gòu)和系統(tǒng)進(jìn)化等進(jìn)行生物信息學(xué)分析預(yù)測(cè),采用qRT-PCR檢測(cè)目標(biāo)基因在珙桐不同組織部位以及種子不同發(fā)育階段中的表達(dá)情況。【結(jié)果】序列分析確定目標(biāo)基因?yàn)橐粋�(gè)編碼CCCH型鋅指蛋白轉(zhuǎn)錄因子的基因,將其命名為DiZF-CCCH1,該基因開(kāi)放閱讀框全長(zhǎng)為711 bp,編碼236個(gè)氨基酸,無(wú)內(nèi)含子,相對(duì)分子量26.74 kDa,為不穩(wěn)定蛋白,其氨基酸序列含有植物特有的RR-TZF結(jié)構(gòu)域,與來(lái)源于甜橙Citrus sinensis的CCCH蛋白同源性最高�；虮磉_(dá)模式分析顯示,DiZF-CCCH1在種子發(fā)育前期的表達(dá)量最高,后期表達(dá)量降低,在其他組織中僅有微量表達(dá),推測(cè)其可能在種子發(fā)育...

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【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 材料
    1.2 珙桐總RNA的提取及cDNA的合成
    1.3 目標(biāo)基因的克隆
    1.4 目標(biāo)基因生物信息學(xué)分析
    1.5 目標(biāo)基因表達(dá)模式分析
2 結(jié)果與分析
    2.1 珙桐種子中差異表達(dá)基因的篩選
    2.2 目標(biāo)基因的克隆
    2.3 生物信息學(xué)分析
        2.3.1 蛋白質(zhì)氨基酸序列的預(yù)測(cè)
        2.3.2 序列分析及聚類分析和亞細(xì)胞定位
        2.3.3 磷酸化位點(diǎn)的預(yù)測(cè)和跨膜區(qū)域的預(yù)測(cè)
        2.3.4 二級(jí)結(jié)構(gòu)和三級(jí)結(jié)構(gòu)的預(yù)測(cè)
    2.4 珙桐DiZF-CCCH1基因表達(dá)模式分析
3 結(jié)論與討論
    3.1 結(jié)論
    3.2 討論
        3.2.1 珙桐DiZF-CCCH1結(jié)構(gòu)域分析
        3.2.2 DiZF-CCCH1在珙桐種子中的特異性表達(dá)



本文編號(hào)：4016290