苦杏仁主要產(chǎn)自新疆,雖然具有極高的利用價(jià)值,但目前對(duì)它的開發(fā)并不充分,浪費(fèi)了它的資源優(yōu)勢(shì)。若能進(jìn)一步對(duì)其進(jìn)行研究和利用,必將發(fā)揮更大的效用并創(chuàng)造極高的收益。本研究基于固定化酶對(duì)苦杏仁谷蛋白的酶解作用進(jìn)行分析,首先對(duì)所使用的蛋白酶進(jìn)行了篩選,最終選擇堿性蛋白酶,然后使用磁性納米粒子制作出固定化微球,進(jìn)而確定制備相應(yīng)酶的最適的工藝。其次,為完成ACE抑制肽的合成,利用了單因素方法確定最合適的酶解條件,并通過響應(yīng)面對(duì)其進(jìn)行優(yōu)化。最后,利用超濾以及層析方法對(duì)得到的短肽進(jìn)行分離提純,通過LC-MS/MS對(duì)其氨基酸序列進(jìn)行分析。本研究得到以下主要結(jié)論:(1)基于苦杏仁谷蛋白進(jìn)行研究,選擇五種較常見的蛋白酶對(duì)其進(jìn)行酶解,分別對(duì)五種酶設(shè)置相應(yīng)的最適條件,分析不同酶對(duì)谷蛋白的作用效果,通過最終得到的短肽數(shù)量以及谷蛋白的水解程度,對(duì)各種酶的酶解能力進(jìn)行比較。結(jié)果表明:相同條件下,堿性蛋白酶的效果最好,并且它的ACE抑制活性也相對(duì)較高,抑制率可達(dá)到68.08±1.96%。(2)利用Fe₃O₄磁性納米粒子固定化堿性蛋白酶,從pH、作用時(shí)間等因素進(jìn)行分析,研究酶的相對(duì)...

【文章頁數(shù)】：66 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

圖2-1不同蛋白酶酶解苦杏仁谷蛋白短肽生成率與水解度變化圖

2.2.1不同蛋白酶酶解苦杏仁谷蛋白水解度和短肽生成率的比較如圖2-1所示,水解初期,水解時(shí)間越長,水解程度就會(huì)越高,反應(yīng)進(jìn)行一段時(shí)間后,由于底物以及酶切位點(diǎn)開始變少,因此反應(yīng)也開始逐漸變得平穩(wěn)起來。通過圖2-1可發(fā)現(xiàn),堿性蛋白酶的短肽生成率以及水解度比起木瓜蛋白酶要高一些。而....

圖3-1給酶量對(duì)固定化效果的影響

3.2.1.1給酶量對(duì)制備固定化酶影響從圖3-1中可以看出,給酶量與相對(duì)酶活力呈正相關(guān)變化趨勢(shì),且差異顯著(P<0.05)。當(dāng)給酶量為2g時(shí),反應(yīng)達(dá)到峰值,此時(shí)酶和載體之間達(dá)到飽和狀態(tài)。繼續(xù)增加給酶量會(huì)受到空間節(jié)點(diǎn)阻塞效果的影響,酶和載體的親和力降低,固定酶的酶活性降低。

圖3-2pH對(duì)固定化效果的影響

3.2.1.2pH對(duì)制備固定化酶的影響從圖3-2中可以看出,相對(duì)酶活力隨pH的增大呈先增加后減少的趨勢(shì),且差異顯著(P<0.05),當(dāng)pH=9.0時(shí)達(dá)到最高值。酶通過靜電吸附,固定在微球球面上,酶和載體表面的電特性都會(huì)受到環(huán)境的影響,從而影響酶與載體之間的有效結(jié)合。在固定過程....

圖3-3戊二醛濃度對(duì)固定化效果的影響

3.2.1.3戊二醛濃度對(duì)制備固定化酶的影響從圖3-3中可以看出,戊二醛濃度與相對(duì)酶活力成正比關(guān)系,且差異顯著(P<0.05)。戊二醛濃度為8%時(shí),相對(duì)酶活力達(dá)到峰值。繼續(xù)增加戊二醛會(huì)使相對(duì)酶活力降低,這是因?yàn)檫^多的戊二醛本身就會(huì)引起水合物聚合,生成許多雜質(zhì)與納米粒子所結(jié)合,....

本文編號(hào)：3932465