采用透明圈法從醬醪中篩選高產(chǎn)β-環(huán)糊精葡萄糖基轉(zhuǎn)移酶（β-CGTase）菌株,通過形態(tài)觀察及分子生物學技術(shù)對其進行菌種鑒定,采用單因素及響應面試驗對該菌的產(chǎn)酶培條件進行優(yōu)化,分析發(fā)酵溫度及時間對產(chǎn)酶的影響,并對該菌所產(chǎn)的β-CGTase酶學性質(zhì)進行研究。結(jié)果表明,從醬醪中篩選得到一株高產(chǎn)β-CGTase的菌株D5,被鑒定為米曲霉（Aspergillus oryzae）,其產(chǎn)β-CGTase的最佳培養(yǎng)基組成為淀粉2.5%、酵母膏1.85%、Na₂CO₃0.35%、K₂HPO₄0.02%、MgSO₄·7H₂O 0.02%,最佳發(fā)酵溫度為30℃,發(fā)酵時間為72 h,在此最優(yōu)發(fā)酵條件下,β-CGTase活力為3 208.01 U/mL。β-CGTase的最適反應溫度為50℃、最適反應p H值為8.5,除Ca²⁺外,Mn²⁺、Fe²⁺、Cu²⁺、Zn²⁺對該... 

【文章來源】：中國釀造. 2020,39(11)北大核心

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【部分圖文】：

菌株D5的初篩結(jié)果

圖1 菌株D5的初篩結(jié)果從醬醪中共分離得到5株霉菌，通過初篩得到3株產(chǎn)透明圈的菌株，編號分別為D1、D2、D5，其中菌株D5產(chǎn)生的透明圈見圖1。發(fā)酵后測定3株菌株的β-環(huán)糊精葡萄糖基轉(zhuǎn)移酶活力，結(jié)果見圖2。由圖2可知，3株菌株中，菌株D5所產(chǎn)β-環(huán)糊精葡萄糖基轉(zhuǎn)移酶活力最高，為1 814 U/m L，因此，選取β-環(huán)糊精葡萄糖基轉(zhuǎn)移酶活力最高的菌株D5為目標菌株。

菌株D5的菌落形態(tài)及菌體形態(tài)見圖3。由圖3可知，菌株D5在分離培養(yǎng)基上生長迅速，30℃培養(yǎng)72 h，菌落直徑為2～3 cm。菌落初期呈白色、黃色，后期變?yōu)榈G褐色，分生孢子頭呈放射狀，孢子呈黃綠色球形，大小均勻。2.2.2 分子生物學鑒定

【參考文獻】：
期刊論文
[1]醬油釀造過程中風味物質(zhì)的形成與鑒定[J]. 李楊,李明達,劉軍,馬軍,李成輝,王中江,江連洲.  食品工業(yè)科技. 2019(04)
[2]米曲霉發(fā)酵高鹽稀態(tài)醬油過程中典型揮發(fā)性風味物質(zhì)的形成[J]. 童佳,趙國忠,趙建新,張灝,陳衛(wèi).  中國釀造. 2017(05)
[3]常壓室溫等離子誘變選育β-環(huán)糊精葡萄糖基轉(zhuǎn)移酶高產(chǎn)菌株及發(fā)酵工藝研究[J]. 張新武.  食品安全質(zhì)量檢測學報. 2016(12)
[4]米曲霉（Aspergillus oryzae FAFU）淀粉酶的分離純化及其酶學性質(zhì)研究[J]. 賈瑞博,胡榮康,周文斌,劉斌,饒平凡,倪莉,陳紹軍,田玉庭,呂旭聰.  食品與發(fā)酵工業(yè). 2016(11)
[5]1株產(chǎn)α-環(huán)糊精葡萄糖基轉(zhuǎn)移酶菌株的產(chǎn)酶條件優(yōu)化[J]. 張曉磊,郝建華,鄭鴻飛,劉均忠,孫謐.  中國海洋藥物. 2015(05)
[6]產(chǎn)β-環(huán)糊精葡萄糖基轉(zhuǎn)移酶高溫菌株HY15發(fā)酵條件優(yōu)化[J]. 曹冬梅,胡耀輝.  中國釀造. 2013(10)
[7]產(chǎn)環(huán)糊精葡萄糖基轉(zhuǎn)移酶菌株發(fā)酵條件的優(yōu)化[J]. 朱德艷.  湖北農(nóng)業(yè)科學. 2013(01)
[8]中國傳統(tǒng)醬油生產(chǎn)用米曲霉菌種研究進展[J]. 紀鳳娣,魯緋,程永強.  北京工商大學學報(自然科學版). 2012(04)
[9]醬醪中產(chǎn)HDMF酵母的分離、篩選及鑒定[J]. 李蕊,王然,郭艷瓊,宋煥祿.  食品與機械. 2011(05)
[10]一株β-環(huán)狀糊精葡萄糖基轉(zhuǎn)移酶產(chǎn)生菌的篩選與發(fā)酵條件研究[J]. 廖威,華慧穎,莫于旺.  廣西輕工業(yè). 2011(02)

碩士論文
[1]米曲霉脂肪酶的基因表達、酶學性質(zhì)及分子改造研究[D]. 藍星.浙江工業(yè)大學 2019
[2]米曲霉耐鹽蛋白酶的分離、純化及其耐鹽機制初步研究[D]. 殷怡云.江蘇大學 2019
[3]α-環(huán)糊精葡萄糖基轉(zhuǎn)移酶中試制備工藝優(yōu)化及酶的應用評價[D]. 陳曉彤.上海海洋大學 2017



本文編號：3489664