馬鈴薯作為第四大主糧在人們的生活中扮演著越來越重要的角色,然而馬鈴薯上的病害對馬鈴薯產(chǎn)業(yè)有著巨大的威脅,其中由致病疫霉引起的馬鈴薯晚疫病是一種危害嚴重的毀滅性病害,因此對于馬鈴薯晚疫病的深入研究十分必要且迫切。致病疫霉會分泌多種效應因子來干擾植物的免疫反應,以達到成功侵染的目的,RXLR效應因子是其中一類具有重要作用的效應因子。課題組前期研究發(fā)現(xiàn),RXLR效應因子PITG₁5556.2HLJ和PITG₂1190.2HLJ能夠在致病疫霉侵染馬鈴薯的過程中上調(diào)表達,推測這兩個效應因子在致病疫霉侵染過程中發(fā)揮一定的作用。在此基礎(chǔ)上,本研究對這兩個效應因子在致病疫霉致病過程中的作用及其分子機理等方面做進一步研究,得出以下結(jié)果:1.利用瞬時表達的方法,在本氏煙和馬鈴薯葉片上表達PITG₁5556.2HLJ并接種致病疫霉孢子懸浮液,發(fā)現(xiàn)PITG₁5556.2HLJ能夠促進致病疫霉在本氏煙和馬鈴薯上的定殖,說明其能夠提高致病疫霉在本氏煙和馬鈴薯上的致病力。2.采用瞬時表達的方法,在本氏煙葉片上將PITG_...

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【學位級別】：碩士

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1 前言
    1.1 馬鈴薯及其產(chǎn)業(yè)現(xiàn)狀
        1.1.1 馬鈴薯
        1.1.2 馬鈴薯產(chǎn)業(yè)現(xiàn)狀
    1.2 馬鈴薯晚疫病
        1.2.1 馬鈴薯晚疫病主要癥狀
        1.2.2 致病疫霉基本特征
        1.2.3 馬鈴薯晚疫病的發(fā)生條件
        1.2.4 馬鈴薯晚疫病防治措施
            1.2.4.1 選用抗病脫毒良種
            1.2.4.2 合理的藥劑防治
            1.2.4.3 田間管理措施
            1.2.4.4 加強預測預報,科學指導防治
    1.3 植物免疫
        1.3.1 三種植物與病原物互作模型
        1.3.2 Zigzag模型
        1.3.3 多種信號通路參與植物免疫
            1.3.3.1 水楊酸信號通路
            1.3.3.2 茉莉酸信號通路
            1.3.3.3 乙烯信號通路
            1.3.3.4 多種信號通路共同作用
    1.4 致病疫霉效應因子
        1.4.1 胞外效應因子
        1.4.2 胞內(nèi)效應因子
        1.4.3 RXLR效應因子功能
            1.4.3.1 RXLR效應因子的毒性作用
            1.4.3.2 RXLR效應因子的無毒作用
            1.4.3.3 RXLR效應因子參與植物免疫調(diào)控
    1.5 PITG₁5556.2^HLJ研究基礎(chǔ)
    1.6 PITG₂1190.2^HLJ研究基礎(chǔ)
    1.7 本研究的目的及意義
2 材料與方法
    2.1 試驗材料
    2.2 試驗方法
        2.2.1 目的基因的克隆
            2.2.1.1 提取基因組
            2.2.1.2 提取植物總RNA
            2.2.1.3 RNA反轉(zhuǎn)錄獲取cDNA
            2.2.1.4 引物設(shè)計
            2.2.1.5 擴增目的片段
            2.2.1.6 PCR產(chǎn)物回收
        2.2.2 載體構(gòu)建
            2.2.2.1 酶切及連接
            2.2.2.2 大腸桿菌熱激轉(zhuǎn)化
            2.2.2.3 菌落PCR檢測
            2.2.2.4 質(zhì)粒提取
        2.2.3 農(nóng)桿菌電擊轉(zhuǎn)化
        2.2.4 煙草、馬鈴薯瞬時表達
        2.2.5 致病疫霉的培養(yǎng)及孢子懸浮液的制備與接種
        2.2.6 熒光定量PCR
        2.2.7 酵母雙雜交篩庫
            2.2.7.1 酵母感受態(tài)的制備
            2.2.7.2 自激活及毒性檢測
            2.2.7.3 mating法雙雜交文庫篩選
        2.2.8 互作蛋白驗證
            2.2.8.1 酵母雙雜交互作驗證
            2.2.8.2 雙分子熒光互補技術(shù)驗證互作
        2.2.9 馬鈴薯遺傳轉(zhuǎn)化
        2.2.10 臺盼藍染色
        2.2.11 DAB染色
3 結(jié)果與分析
    3.1 效應因子PITG₁5556. 2^HLJ功能分析
        3.1.1 PITG₁5556.2^HLJ促進致病疫霉在本氏煙上的侵染
        3.1.2 PITG₁5556. 2^HLJ促進致病疫霉在馬鈴薯上的定殖
        3.1.3 效應因子PITG₁5556. 2^HLJ抑制植物的ETI和PTI
        3.1.4 PITG₁5556.2^HLJ抑制植物中過氧化氫的積累
        3.1.5 馬鈴薯遺傳轉(zhuǎn)化
        3.1.6 轉(zhuǎn)基因馬鈴薯植株陽性鑒定
        3.1.7 轉(zhuǎn)基因植株對株高的影響
        3.1.8 酵母雙雜交篩選互作蛋白
            3.1.8.1 誘餌蛋白載體構(gòu)建
            3.1.8.2 誘餌蛋白自激活及毒性檢測
            3.1.8.3 篩選PITG₁5556.2^HLJ的互作蛋白
        3.1.9 互作蛋白驗證
            3.1.9.1 點對點互作驗證
            3.1.9.2 雙分子熒光互補驗證蛋白互作
    3.2 效應因子PITG₂1190.2^HLJ功能分析
        3.2.1 PITG₂1190.2^HLJ促進致病疫霉對本氏煙的侵染
        3.2.2 PITG₂1190.2^HLJ促進致病疫霉對馬鈴薯的侵染
        3.2.3 PITG₂1190.2^HLJ抑制INF1,BAX,NIP,Avh238,Avh241激起的HR
        3.2.4 PITG₂1190.2的等位基因?qū)Ρ臼蠠烢TI、PTI有抑制作用
        3.2.5 PITG₂1190.2^HLJ對激素信號路徑的影響
        3.2.6 PITG₂1190.2^HLJ降低本氏煙中過氧化氫的積累
4 討論
    4.1 PITG₁5556.2^HLJ、PITG₂1192.2^HLJ的致病性分析
    4.2 PITG₁5556.2^HLJ、PITG₂1190.2^HLJ對植物PTI和ETI的影響
    4.3 PITG₁5556.2^HLJ和PITG₂1190.2^HLJ參與調(diào)控植物多種免疫反應
    4.4 PITG₁5556.2^HLJ的候選互作蛋白
5 結(jié)論
6 參考文獻
附錄
致謝



本文編號：3904420