乳房炎是危害奶牛養(yǎng)殖業(yè)最為常見的疾病之一,在圍產(chǎn)期發(fā)病率較高,該病的主要病因是細(xì)菌感染。核苷酸結(jié)合寡聚域(Nucleotide binding oligomerization domain,NOD)2是NOD樣受體(NOD like receptors,NLR)家族中的重要一員,它參與機(jī)體免疫防御反應(yīng)。雌二醇(17β-Estrodiol,E₂)和孕酮(Progesterone,P₄)是具有免疫調(diào)節(jié)功能的生殖激素,二者濃度在圍產(chǎn)期的顯著變化,與圍產(chǎn)期感染性疾病高發(fā)有一定的相關(guān)性。因此,本試驗以原代培養(yǎng)的奶牛乳腺上皮細(xì)胞(Bovine mammary epithelial cells,BMEC)為模型,探討E₂和P₄對BMEC中NOD2受體表達(dá)及功能的影響。試驗方法如下:(1)試驗采用膠原酶Ⅰ消化法培養(yǎng)BMEC;采用不同濃度胰酶消化法,結(jié)合差速貼壁方法分離純化BMEC;利用免疫熒光技術(shù)檢測BMEC中角蛋白(Cytokeratin,CK)-18的表達(dá)情況,對BMEC進(jìn)行鑒定;利用Western Blot方...

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【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖2.1奶牛乳腺上皮細(xì)胞的培養(yǎng)結(jié)果(100×)

.1.3.2奶牛乳腺上皮細(xì)胞的培養(yǎng)BMEC的培養(yǎng)結(jié)果如圖2.1(A)所示，在培養(yǎng)的第3天即可觀察到“鵝卵石”或“鋪”樣的BMEC(黑色箭頭所示)，以及形狀不規(guī)則或多角形的成纖維細(xì)胞(白色箭頭所示BMEC成片區(qū)域性生長，而成纖維細(xì)胞分散于BMEC外圍；如圖2.....

圖2.2奶牛乳腺上皮細(xì)胞的分離純化結(jié)果(100×)

圖2.2奶牛乳腺上皮細(xì)胞的分離純化結(jié)果(100×)Fig.2.2Theresultsofseparationandpurificationforbovinemammaryepithelialcells(100×)：奶牛乳腺上皮細(xì)胞的第1次純化；(....

圖2.3奶牛乳腺上皮細(xì)胞的鑒定Fig.2.3Theidentificationresultsofbovinemammaryepithelialcells.(A)：光鏡下的奶牛乳腺上皮細(xì)胞；(B)：奶牛乳腺上皮細(xì)胞DAPI核染色；(C)：奶牛乳腺上皮細(xì)胞CK-18陽性反應(yīng)；(D)：(B)、(C)融合圖

腺上皮細(xì)胞的第3次純化。):Bovinemammaryepithelialcellswerepurifiedforthefirsttime;(B):Bovinemammpithelialcellswerepurifiedforthesec....

圖2.4奶牛乳腺上皮細(xì)胞的生長曲線

llswerestainedbyDAPI;(C):CK-18pos;(D):Mergedfigure(B)andfigure(C).胞的生長曲線況繪制的生長曲線如圖2.4所示，在傳代后EC生長迅速，呈現(xiàn)對數(shù)生長；培養(yǎng)至6~7

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