本文關(guān)鍵詞：中國(guó)荷斯坦奶牛HSP70-1基因多態(tài)性與耐熱性能相關(guān)性分析，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：熱應(yīng)激對(duì)奶牛的健康造成巨大傷害,并且降低奶牛生產(chǎn)性能,給生產(chǎn)帶來嚴(yán)重?fù)p失。熱應(yīng)激蛋白70(HSP70)作為分子伴侶,在奶牛發(fā)生熱應(yīng)激時(shí)能保護(hù)機(jī)體免受或減輕傷害。本文以溫濕指數(shù)(THI)作為參照指標(biāo),比較中國(guó)荷斯坦奶牛熱應(yīng)激期和非熱應(yīng)激期生理常數(shù)、血液生化指標(biāo)及生產(chǎn)性能變化。采用PCR-SSCP檢測(cè)HSP70-1基因單核苷酸多態(tài)性,使用Western-blot方法檢測(cè)奶牛熱應(yīng)激時(shí)淋巴細(xì)胞HSP70蛋白表達(dá)水平。通過SPSS軟件對(duì)SNPs與HSP70表達(dá)水平、生理常數(shù)、血清生化指標(biāo)及生產(chǎn)性能進(jìn)行關(guān)聯(lián)分析。實(shí)驗(yàn)一。從福建長(zhǎng)富某牛場(chǎng)核心群隨機(jī)選擇458頭中國(guó)荷斯坦泌乳牛進(jìn)行實(shí)驗(yàn),分別于非熱應(yīng)激期(2013年11月至2014年1月)和熱應(yīng)激期(2014年7月至9月)期間,測(cè)定牛舍溫濕指數(shù)(THI)、奶牛生理常數(shù)、血清生化指標(biāo)及生產(chǎn)性能。結(jié)果表明：處于中度熱應(yīng)激時(shí),奶牛直腸溫顯著升高(P0.05),呼吸頻率極顯著加快(P0.01)；血清T4和Cor濃度分別下降23.80%(P0.01)和36.20%(P0.01),血清T3和INS濃度下降,但差異均不顯著(P0.05)；血清Glu下降25.50%(P0.01),血清BUN濃度升高32.14%(P0.01),血清TG濃度沒有顯著變化；產(chǎn)奶量、乳蛋白率和乳脂率分別下降了17.75%(P0.05)、5%(P0.05)和23%(P0.01)。實(shí)驗(yàn)二。采用PCR-SSCP療法,檢測(cè)458頭處于泌乳期中國(guó)荷斯坦奶牛的HSP70-1基因單核苷酸多態(tài)性,與耐性能進(jìn)行關(guān)聯(lián)分析。根據(jù)CNKI登錄號(hào)為AY149619的HSP70-1基因,使用primer 5.0設(shè)計(jì)12對(duì)引物。結(jié)果發(fā)現(xiàn)：在HSP70-1基因1112位點(diǎn)發(fā)生了C-A突變,有AA、AB及BB 3種基因型；3390位點(diǎn)發(fā)生T-C突變,有CC、CD及DD 3種基因型；4583位點(diǎn)發(fā)生T-C突變,有EE和EF 2種基因型；5886位點(diǎn)A堿基缺失,有HH和HI 2種基因型。采用Western-blot結(jié)合光密度分析檢測(cè)奶牛HSP70表達(dá)水平。使用SPSS軟件建立一般線性模型,對(duì)SNPs與生理常數(shù)、血清生化指標(biāo)、HSP70表達(dá)水平及生產(chǎn)性能進(jìn)行關(guān)聯(lián)分析。結(jié)果表明：C1112A位點(diǎn)與HSP70表達(dá)水平、直腸溫度、產(chǎn)奶量、體細(xì)胞數(shù)顯著相關(guān)。其中：AB及AA型個(gè)體直腸溫度顯著低于BB型個(gè)體(P0.05)；AB型個(gè)體血清T3濃度顯著低于AA和BB個(gè)體(P0.05),T4濃度顯著低于BB個(gè)體(P0.05)低于AA個(gè)體,但差異不顯著(P0.05)；AB型個(gè)體HSP70蛋白表達(dá)量顯著高于AA、BB型個(gè)體(P0.05)；AB型個(gè)體熱應(yīng)期產(chǎn)奶量顯著高于AA、BB型個(gè)體(P0.05),分別高了9%和13%；AB型個(gè)體乳體細(xì)胞數(shù)顯著低于AA和BB型個(gè)體(P0.05)。T3390C位點(diǎn)與乳脂率顯著相關(guān)(P0.05),其中DD型個(gè)體顯著高于CC型和CD型個(gè)體(P0.05)。其他位點(diǎn)與生產(chǎn)性能均不相關(guān)�？梢�,AB型為耐熱基因型,可作為奶牛耐熱基因的分子遺傳參考標(biāo)記。
【關(guān)鍵詞】：熱應(yīng)激 血液生化 PCR-SSCP HSP70 Western-blot
【學(xué)位授予單位】：福建農(nóng)林大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：S823
【目錄】：

• 摘要7-9
• ABSTRACT9-11
• 第一章 文獻(xiàn)綜述11-19
• 引言11
• 1 熱應(yīng)激對(duì)奶牛的影響11-15
• 1.1 熱應(yīng)激的評(píng)定標(biāo)準(zhǔn)11
• 1.2 熱應(yīng)激對(duì)奶牛生產(chǎn)性能的影響11-14
• 1.3 熱應(yīng)激對(duì)血液生化指標(biāo)的影響14
• 1.4 熱應(yīng)激對(duì)奶牛的損傷14-15
• 2 緩解熱應(yīng)激的措施15-16
• 2.1 改進(jìn)場(chǎng)地建設(shè)及科學(xué)管理飼養(yǎng)15
• 2.2 營(yíng)養(yǎng)調(diào)控緩解奶牛熱應(yīng)激15-16
• 2.3 抗熱基因篩選16
• 3 HSP70蛋白研究進(jìn)展16-17
• 3.1 HSP70蛋白生物學(xué)功能16-17
• 4 HSP70-1基因多態(tài)性研究進(jìn)展17-18
• 4.117-18
• 4.1.1 PCR-SSCP在單核苷酸多態(tài)性(SNP)中的應(yīng)用17-18
• 4.1.2 PCR-SCCP的工作原理18
• 4.2 HSP70-1 SNP位點(diǎn)與牛奶熱應(yīng)激相關(guān)性狀研究進(jìn)展18
• 5 本研究的目的和意義18-19
• 第二章 實(shí)驗(yàn)部分19-47
• 實(shí)驗(yàn)一 熱應(yīng)激對(duì)中國(guó)荷斯坦奶牛生理、血清生化指標(biāo)及生產(chǎn)性能影響19-25
• 1 實(shí)驗(yàn)材料及方法19-20
• 1.1 實(shí)驗(yàn)材料19
• 1.2 實(shí)驗(yàn)方法19-20
• 1.3 數(shù)據(jù)處理20
• 2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析20-22
• 2.1 熱應(yīng)激對(duì)奶牛生理常數(shù)影響20-21
• 2.2 熱應(yīng)激對(duì)血清生化指標(biāo)影響21
• 2.3 熱應(yīng)激對(duì)產(chǎn)奶量影響21-22
• 2.4 熱應(yīng)激對(duì)乳成分影響22
• 3 討論22-24
• 3.1 熱應(yīng)激對(duì)生理指標(biāo)影響22
• 3.2 熱應(yīng)激對(duì)血清生化指標(biāo)影響22-23
• 3.3 熱應(yīng)激對(duì)產(chǎn)奶量及乳成分影響23-24
• 4 小結(jié)24-25
• 實(shí)驗(yàn)二 HSP70-1基因SNP位點(diǎn)與耐熱指標(biāo)關(guān)聯(lián)性分析25-47
• 1 實(shí)驗(yàn)材料及方法25-29
• 1.125-26
• 1.2 實(shí)驗(yàn)方法26-27
• 1.3 HSP70-1多態(tài)位點(diǎn)檢測(cè)27-29
• 2 淋巴細(xì)胞HSP70蛋白表達(dá)測(cè)定29-31
• 3 結(jié)果統(tǒng)計(jì)31-32
• 3.1 基因頻率、基因型頻率計(jì)算31
• 3.2 哈代-溫伯格平衡檢測(cè)(Hardy-Weinberg)31
• 3.3 群體遺傳多態(tài)性31-32
• 3.4 建立分析模型及數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)32
• 4 結(jié)果與分析32-45
• 4.1 HSP70-1基因多態(tài)位點(diǎn)檢測(cè)32-37
• 4.2 SNPs與生理常數(shù)關(guān)聯(lián)分析37-38
• 4.3 SNPs與血清生化指標(biāo)關(guān)聯(lián)分析38-40
• 4.4 SNPs與淋巴細(xì)胞HSP70表達(dá)關(guān)聯(lián)分析40-42
• 4.5 SNPs與生產(chǎn)性能關(guān)聯(lián)分析42-44
• 4.6 SNPs與體細(xì)胞數(shù)關(guān)聯(lián)分析44-45
• 5 討論45-46
• 5.1 HSP70-1單核甘酸多態(tài)性45
• 5.2 SNP對(duì)HSP70蛋白表達(dá)影響45
• 5.3 SNP對(duì)生理常數(shù)、生產(chǎn)性能、血清生化及體細(xì)胞數(shù)影響45-46
• 6 小結(jié)46-47
• 全文結(jié)論47
• 本文創(chuàng)新點(diǎn)和有待進(jìn)一步研究的問題47-48
• 參考文獻(xiàn)48-56
• 致謝56

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1 王

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