本文關(guān)鍵詞：核桃枝枯病病原鑒定及藥劑防治研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：核桃枝枯病(Walnut branches blight)是由真菌侵染引起核桃枝條枯萎、腐爛斷裂的一種嚴(yán)重病害,其傳播媒介主要是空氣、雨水和昆蟲鳥獸等。盡管國內(nèi)外的專家學(xué)者對核桃枝枯病展開過廣泛的研究,然而復(fù)雜的地域地形,氣候土壤環(huán)境、病害病原等特點,引起核桃枝枯病的病原癥狀也存在一定的差距。本文以四川地區(qū)的雅安、綿陽、宜賓一些主要核桃栽培區(qū)進(jìn)行枝枯病調(diào)查與研究,分析其生長環(huán)境條件,確定發(fā)病規(guī)律與流行癥狀。以防治為最終目的,主要通過對四川核桃枝枯病的侵染調(diào)查,病原種類鑒定,病原生物學(xué)特性,田間病害動態(tài)觀察及室內(nèi)外防治研究,取得如下結(jié)果：(1)通過2014-2015年持續(xù)對核桃主要栽培地的田間發(fā)病動態(tài)觀察,結(jié)果表明,核桃枝枯病發(fā)病初期由感染的小斑點向四周擴散,形成塊狀、橢圓形或者不規(guī)則形,傷口部位的顏色由最初的暗綠色或者嫩綠色逐漸變成灰黑色、全黑色。該病在春季回暖的3-4月開始發(fā)病,并迅速擴展,到夏季成為病發(fā)高峰期,尤其在7-8月份達(dá)到了發(fā)病高潮,病株率為35%；9-10月份病害逐漸減弱,12月-2月份病情處于停滯狀態(tài)；結(jié)合全年的觀察確定發(fā)病初期在3月份,高峰期在7-8月。(2)通過科赫假定法則,按實驗方法回接分離純化的菌株,接種7d觀察,病斑由小范圍迅速擴展,并幾乎都引起了枝枯病的癥狀,對病株按常規(guī)分離培養(yǎng)后,發(fā)現(xiàn)獲得的病原菌特征與原接種時的病原菌特征基本一致,即確認(rèn)BH01-BH05為引起核桃枝枯病的病菌。(3)通過對菌株BH01-BH05菌落菌絲、孢子形態(tài)、顏色變化的形態(tài)學(xué)觀察,發(fā)現(xiàn)長勢、顏色、形態(tài)大小特征基本一致,因此確定BH01-BH05為同一菌種,參考相關(guān)文獻(xiàn)并結(jié)合分子生物學(xué)序列測試,建立系統(tǒng)發(fā)育樹,確定該菌BH01為新殼梭孢(Neofusicoccum parvum)。該菌一般7d布滿整個直徑9cm的PDA培養(yǎng)平板,形成圓形或者近似圓形的菌落,經(jīng)過紫外線照射10min中左右再培養(yǎng)7d后產(chǎn)孢子能力較快,分生孢子成近似圓形或橢圓形狀,一般大小在(15.2-17.2)μm×(4.6-6.4)μm而在rDNA-ITS序列擴增與序列測序,通過軟件clustalX和Mega 5.0軟件進(jìn)行分析比對,建立系統(tǒng)發(fā)育樹發(fā)現(xiàn)其中與該菌處于平行樹上的Neofusicoccum parvum (GenBank登陸號：FJ904915)同源性最高,達(dá)到99%。該菌在國外瑞典、秘魯曾引起葡萄、核桃等的枝枯病,而引起我國核桃枝枯病系首次報道。(4)通過核桃枝枯病病原生物學(xué)特性的測定,核桃枝枯病能夠流行和快速的傳播有一個與之較適應(yīng)的的環(huán)境生態(tài)條件,實驗發(fā)現(xiàn)該菌新殼梭孢(Neofusicoccum parvum)在不同培養(yǎng)基下均能生長,但PDA培養(yǎng)基生長最好、其次PSA培養(yǎng)基、查氏培養(yǎng)基相對較好。該菌生長適溫為25-35℃,其中最適溫度為25℃。在pH各個范圍均能生長,但最適生長為pH8。有光照的、相對濕度較高條件下有利于該菌最快。最佳碳源為葡萄糖,最次為甘露醇；最佳氮源為谷氨酸,而尿素對菌落抑制明顯,使其生長緩慢；通過測定,確定致死溫度為60℃。根據(jù)結(jié)果可以判定四川盆地環(huán)境的夏末秋初環(huán)境下,溫度高,濕度較大,與實驗中生物學(xué)特性測定的最適宜環(huán)境相近,病害也發(fā)生嚴(yán)重的時候,因此對該病害發(fā)生與流行間斷具有可預(yù)測性,為病害高峰期前進(jìn)行重點防治工作提供了重要的理論依據(jù)(5)在病原菌的傳播與越冬過程中發(fā)現(xiàn),核桃枝枯病主要通過雨水、風(fēng)、空氣,昆蟲等傳播,其中腐朽的枯枝在第二年也會更容易引起病害,因此在平時注意做好修剪整形與核桃的防水工作,做好秋冬季節(jié)田間枯枝殘葉的清理工作,并及時祛除植株枝干上的病葉并提前進(jìn)行藥劑防治,可適當(dāng)?shù)臏p少病害浸染源頭。該菌在冬季生長能力弱,發(fā)病率低或者不發(fā)病,但是在春季溫度偏暖的情況下會發(fā)病。(6)通過室內(nèi)藥劑篩選結(jié)果,9種藥劑在濃度1.25ug/mL-40ug/mL的中,均對病原菌有一定的抑制作用。隨著藥劑濃度的增大菌落開始變小,其中藥效試驗對核桃枝枯病的菌絲的抑制結(jié)果表明,在有效中濃度測定中,甲基托布津、多菌靈和百菌清對核桃枝枯病菌有明顯的抑制作用,甲基托布津?qū)Σ≡腅C50值最小,為4.5214ug/mL,表明藥劑抑制最好,其次為多菌靈和百菌清,其EC50值分別為4.6240 ug/mL,7.1930 ug/mL。在盆栽實際防治中發(fā)現(xiàn),同一濃度條件,防治效果最好的是甲基托布津,其次為多菌靈和百菌清,與室內(nèi)藥劑篩選一致,其中野外最佳防效濃度要高于室內(nèi)藥劑篩選的最佳防效濃度,原因復(fù)雜氣候與地理位置等。
【關(guān)鍵詞】：核桃枝枯病 病原鑒定 生物學(xué)特性 發(fā)生規(guī)律 藥劑防治
【學(xué)位授予單位】：四川農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：S436.64
【目錄】：

• 摘要4-6
• 英文摘要6-11
• 前言11-12
• 1. 文獻(xiàn)綜述12-21
• 1.1 核桃種質(zhì)資源概況12-14
• 1.2 核桃病害研究進(jìn)展14-19
• 1.3 核桃枝枯病研究進(jìn)展19-21
• 2. 研究目的與意義21-22
• 3. 研究內(nèi)容與技術(shù)路線22-23
• 3.1 研究內(nèi)容22
• 3.2 技術(shù)路線22-23
• 4. 材料與方法23-32
• 4.1 核桃枝枯病的調(diào)查與病害診斷23-25
• 4.1.1 核桃枝枯病的調(diào)查23
• 4.1.2 病害診斷23-25
• 4.2 核桃枝枯病病原鑒定25-27
• 4.2.1 實驗材料25-26
• 4.2.2 形態(tài)學(xué)鑒定與分子生物學(xué)鑒定26-27
• 4.3 病原菌的生物學(xué)特性測定27-29
• 4.3.1 實驗材料27
• 4.3.2 病原菌生物學(xué)特性研究27-29
• 4.4 病害發(fā)生規(guī)律的確定29-30
• 4.4.1 病原菌接種侵染與越冬觀察29
• 4.4.2 病害動態(tài)觀察29-30
• 4.5 室內(nèi)藥劑篩選及盆栽實驗防效測定30-32
• 4.5.1 實驗材料30-31
• 4.5.2 室內(nèi)毒力測定實驗31
• 4.5.3 盆栽實驗及防效測定31-32
• 5. 結(jié)果與分析32-47
• 5.1 核桃枝枯病病害的調(diào)查32-34
• 5.1.1 核桃枝枯病病害癥狀與危害32-33
• 5.1.2 核桃枝枯病診斷33-34
• 5.2 核桃枝枯病病原菌鑒定34-37
• 5.2.1 核桃枝枯病病原菌的形態(tài)學(xué)鑒定34-35
• 5.2.2 核桃枝枯病病原菌的分子生物學(xué)鑒定35-37
• 5.3 病原菌的生物學(xué)特性測定37-42
• 5.3.1 不同培養(yǎng)基對菌絲生長的影響37-38
• 5.3.2 不同溫度對菌絲成長的影響38
• 5.3.3 不同光照條件對菌絲生長的影響38-39
• 5.3.4 不同pH值對菌絲生長的影響39-40
• 5.3.5 不同碳源、氮源對菌絲生長的影響40-41
• 5.3.6 不同濕度對菌絲生長的影響41
• 5.3.7 致死溫度的測定41-42
• 5.4 病害發(fā)生規(guī)律的確定42-43
• 5.4.1 病原菌侵染與越冬觀察42-43
• 5.4.2 病害動態(tài)觀察43
• 5.5 室內(nèi)藥劑篩選及盆栽防效43-47
• 5.5.1 室內(nèi)藥劑篩選43-46
• 5.5.2 盆栽防效測定46-47
• 6 結(jié)論與討論47-50
• 6.1 核桃枝枯病的調(diào)查與病害診斷47-48
• 6.2 核桃枝枯病病原鑒定48
• 6.3 核桃枝枯病病原生物學(xué)特性48-49
• 6.4 病害發(fā)生規(guī)律的確定49
• 6.5 室內(nèi)藥劑篩選及盆栽防效49-50
• 參考文獻(xiàn)50-54
• 致謝54

【相似文獻(xiàn)】

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本文編號：376166