牦牛(Bos grunniens)是生活在高寒低氧地區(qū)具有重要文化和生產(chǎn)意義的放牧動物。由于受地勢、氣候等環(huán)境因素的制約,其體內(nèi)脂肪組織的消長波動較大。在暖季,由于牧草充足,牦牛體內(nèi)脂肪組織迅速囤積以維持漫長冷季里足夠的體溫和能量代謝。目前諸多研究發(fā)現(xiàn),脂肪組織發(fā)育及脂代謝離不開miRNAs的分子調(diào)控,但在牦牛上對脂肪發(fā)生和脂肪沉積相關(guān)miRNAs的研究缺乏,亟需挖掘。因此,研究miRNAs在牦牛脂肪細胞增殖、分化及特殊脂代謝調(diào)控中的分子作用機理,可能為牦牛脂肪發(fā)生和脂肪沉積的生理學(xué)研究提供理論依據(jù)。本試驗以牦牛為研究對象,利用實時熒光定量PCR(RT-qPCR)檢測bta-miR-2400在牦牛心臟、肝臟、脾臟、肺、腎臟、背最長肌、皮下脂肪中的表達規(guī)律。培養(yǎng)牦牛前體脂肪細胞,經(jīng)油紅O染色觀察誘導(dǎo)分化過程中脂滴的積累情況并通過RT-qPCR檢測誘導(dǎo)分化過程中bta-miR-2400和成脂分化標志基因的表達水平。通過轉(zhuǎn)染bta-miR-2400 mimics和bta-miR-2400 inhibitor于牦牛前體脂肪細胞,利用RT-qPCR和CCK-8檢測在過表達和抑制表達bta-miR...

【文章頁數(shù)】：62 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
項目資助
摘要
ABSTRACT
縮略語表(ABBREVIATION)
第1章 文獻綜述
    引言
    1.1 miRNA的產(chǎn)生及調(diào)控
    1.2 脂肪細胞概述
        1.2.1 脂肪組織分類
        1.2.2 脂肪細胞的來源和形成
    1.3 脂肪細胞的增殖與分化
        1.3.1 脂肪細胞的增殖
        1.3.2 脂肪細胞的分化
    1.4 miRNA調(diào)控脂肪細胞增殖、分化
        1.4.1 miRNA通過轉(zhuǎn)錄因子調(diào)控脂肪細胞
        1.4.2 miRNA參與信號通路調(diào)控脂肪細胞
    1.5 研究目的與意義
第2章 材料與方法
    2.1 試驗材料
        2.1.1 組織樣品
        2.1.2 牦牛前體脂肪細胞
    2.2 試驗設(shè)備與試劑
        2.2.1 實驗試劑及儀器
        2.2.2 試劑配制
        2.2.3 相關(guān)生物信息學(xué)網(wǎng)站及分析軟件
    2.3 試驗方法
        2.3.1 牦牛前體脂肪細胞制備
        2.3.2 牦牛脂肪細胞傳代培養(yǎng)
        2.3.3 牦牛前體脂肪細胞誘導(dǎo)分化
        2.3.4 牦牛脂肪細胞轉(zhuǎn)染
        2.3.5 bta-miR-2400 的功能研究
        2.3.6 總RNA提取及質(zhì)量檢測
        2.3.7 c DNA合成
        2.3.8 Real-time PCR
        2.3.9 油紅O染色
        2.3.10 甘油三酯檢測
        2.3.11 CCK-8 檢測
        2.3.12 bta-miR-2400 的靶基因預(yù)測與雙熒光素酶報告檢測
        2.3.13 bta-miR-2400 在組織和細胞中的表達量分析
第3章 結(jié)果與分析
    3.1 bta-miR-2400 表達模式
        3.1.1 bta-miR-2400 在牦牛各組織中的分布
        3.1.2 bta-miR-2400 牦牛前體脂肪細胞時序表達
    3.2 bta-miR-2400 對牦牛前體脂肪細胞增殖的影響
        3.2.1 牦牛前體脂肪細胞的培養(yǎng)及形態(tài)學(xué)觀察
        3.2.2 bta-miR-2400 促進牦牛前體脂肪細胞增殖
    3.3 bta-miR-2400 對牦牛前體脂肪細胞分化的影響
        3.3.1 牦牛前體脂肪細胞誘導(dǎo)分化
        3.3.2 PPARγ、C/EBPα、FABP4 表達變化
        3.3.3 細胞內(nèi)甘油三酯(TG)含量測定
        3.3.4 過表達(抑制)bta-miR-2400 后脂肪細胞分化標志基因表達變化
    3.4 bta-miR-2400 靶基因預(yù)測及功能驗證
        3.4.1 bta-miR-2400 靶基因預(yù)測
        3.4.2 雙熒光素酶報告基因測定
        3.4.3 SUMO1 在誘導(dǎo)分化和轉(zhuǎn)染之后的表達水平
第4章 討論
    4.1 bta-miR-2400 的表達模式
    4.2 牦牛前體脂肪細胞的分離培養(yǎng)與誘導(dǎo)分化
    4.3 bta-miR-2400 對牦牛前體脂肪細胞增殖、分化的作用
    4.4 bta-miR-2400 靶基因預(yù)測及功能分析
第5章 結(jié)論
創(chuàng)新點
參考文獻
致謝
作者簡介
導(dǎo)師簡介



本文編號：3749003