發(fā)布時間：2023-02-16 08:57

　　衣原體(Chlamydia spp)是一類革蘭氏陰性、專性細胞內(nèi)寄生、具有獨特雙相發(fā)育周期、可感染人和動物而引起多種傳染性疾病的原核微生物。目前已在感染動物中發(fā)現(xiàn)流產(chǎn)衣原體、家畜衣原體、豬衣原體、鸚鵡熱衣原體和鼠衣原體等17個衣原體種類。自上世紀70年代在青海牧場牛羊群中發(fā)現(xiàn)有綿羊因感染衣原體而引起流產(chǎn)以來,目前已在國內(nèi)多個省(區(qū))先后有綿羊、山羊、豬和奶牛因感染衣原體引發(fā)流產(chǎn)疫病的報道。但此類報道主要是畜群內(nèi)的血清流行病學調(diào)查和動物病例的個案分析,缺乏區(qū)域性或全國范圍的分子流行病學調(diào)查研究,從而限制了對動物感染衣原體的預防措施或方法的科學制定和有效實施。本研究采集羊群陰道、直腸拭子,流產(chǎn)胎兒等樣品、通過PCR基因擴增及測序分析,衣原體分離培養(yǎng)等技術(shù)手段對我國西北地區(qū)綿羊群和陜西關(guān)中地區(qū)山羊群感染的衣原體病原遺傳多樣性進行了調(diào)查研究。同時,利用分子生物學技術(shù)通過構(gòu)建原核表達載體,在大腸桿菌中克隆表達了流產(chǎn)衣原體蛋白酶樣活性因子(chlamydial protease like activity factor,CPAF)的全長編碼基因,誘導獲得其重組蛋白,為進一步建立動物感染流產(chǎn)衣原體的...

【文章頁數(shù)】：72 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
第一章 文獻綜述
    1.衣原體概述
    2.衣原體與人和動物的健康
        2.1 沙眼衣原體
        2.2 鼠衣原體
        2.3 肺炎衣原體
        2.4 流產(chǎn)衣原體
        2.5 家畜衣原體
        2.6 鸚鵡熱衣原體
        2.7 豬衣原體
        2.8 貓衣原體
        2.9 豚鼠衣原體
        2.10 其他衣原體
    3.衣原體的檢測方法
        3.1 病原學檢測
        3.2 血清學檢測
        3.3 核酸檢測
    4.流產(chǎn)衣原體的分型研究
        4.1 基于ompA基因序列的分型
        4.2 MLVA分型
        4.3 MLST分型
    5.結(jié)語和展望
第二章 西北地區(qū)綿羊衣原體多樣性研究
    1.材料和方法
        1.1 試劑、菌種載體
        1.2 主要儀器
        1.3 主要溶液的配制
        1.4 樣品采集
        1.5 樣品DNA提取
        1.6 各衣原體種檢測標準品的制備
        1.7 計算質(zhì)�？截悢�(shù)
        1.8 建立質(zhì)粒標準曲線
        1.9 熒光定量PCR檢測衣原體的引物和探針
        1.10 PCR擴增引物
        1.11 PCR反應體系及反應程序
        1.12 核酸電泳
        1.13 目的基因的回收測序
        1.14 系統(tǒng)發(fā)育分析
        1.15 MLVA分析
        1.16 MLST分析
        1.17 數(shù)據(jù)分析
    2.結(jié)果
        2.1 衣原體熒光定量PCR檢測方法
        2.2 西北地區(qū)綿羊樣品中衣原體的流行及分布情況
        2.3 流產(chǎn)衣原體和家畜衣原體的鑒定
        2.4 基于ompA序列的流產(chǎn)衣原體和家畜衣原體多樣性分析
        2.5 流產(chǎn)衣原體流行菌株MLVA和 MLST分析
    3.討論
第三章 陜西關(guān)中奶山羊衣原體多樣性研究
    1.材料和方法
        1.1 細胞株、菌種、主要試劑
        1.2 主要儀器
        1.3 樣品采集
        1.4 衣原體菌株的分離
        1.5 衣原體菌株的細胞培養(yǎng)
        1.6 免疫熒光染色
    2.結(jié)果
        2.1 奶山羊衣原體檢測
        2.2 奶山羊樣品中衣原體種的鑒定
        2.3 基于ompA序列的奶山羊衣原體流行株多樣性分析
        2.4 奶山羊流產(chǎn)衣原體流行菌株MLVA和 MLST分析
        2.5 奶山羊流產(chǎn)衣原體的分離培養(yǎng)
    3.討論
第四章 流產(chǎn)衣原體CPAF基因的克隆序列分析及原核表達
    1.材料和方法
        1.1 試驗材料
        1.2 試驗方法
    2.結(jié)果與分析
        2.1 PCR擴增結(jié)果及重組原核表達載體的鑒定
        2.2 CPAF編碼基因的序列分析及蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)預測
        2.3 重組蛋白誘導表達條件的優(yōu)化
        2.4 重組蛋白的Western Blot分析
    3.討論
全文結(jié)論
創(chuàng)新點
參考文獻
致謝
作者簡介
碩士期間已發(fā)表論文



本文編號：3743925