氟苯蟲酰胺抗性對小菜蛾生殖的影響機制初探
發(fā)布時間：2021-11-21 13:26
小菜蛾（Plutella xylostella L.）為重要的十字花科蔬菜害蟲,因其生命周期短、世代重疊嚴重、繁殖能力強以及生產(chǎn)中不合理用藥,使得其對絕大多數(shù)殺蟲劑產(chǎn)生了抗藥性。氟苯蟲酰胺因其新穎的作用靶標,良好的速效、持效性以及對哺乳動物的低毒性等優(yōu)勢而得到廣泛應用,但小菜蛾對氟苯蟲酰胺的抗性問題也越來越突出。為探討小菜蛾對氟苯蟲酰胺的抗性與生殖發(fā)育之間的關系,本項目以敏感品系（S）、室內(nèi)篩選的氟苯蟲酰胺抗性品系（Rf）、田間抗性種群（Rb）三個品系/種群為研究對象,分別利用熒光定量PCR和超高效液相串聯(lián)質譜法等多種方法開展研究,得到的結果如下:1.在前期抗性汰選的基礎上,繼續(xù)采用浸漬法獲得了對氟苯蟲酰胺抗性達946.95倍的高抗小菜蛾品系（Rf）,且魚尼丁受體4946位點基因型為GAG。測得小菜蛾田間抗性種群（Rb）對氟苯蟲酰胺的抗性倍數(shù)1115.06倍。2.為進一步研究小菜蛾生殖與抗性之間的作用機制,用熒光定量PCR分析比較抗性小菜蛾和敏感品系小菜蛾成蟲卵黃原蛋白（PxVg）基因、卵黃原蛋白受...
【文章來源】：山東農(nóng)業(yè)大學山東省
【文章頁數(shù)】：62 頁
【學位級別】：碩士
【部分圖文】：
小菜蛾對氟苯蟲酰胺的抗性發(fā)展規(guī)律
山東農(nóng)業(yè)大學碩士學位論文223.2不同品系/種群小菜蛾生殖相關基因表達差異與酶活性分析3.2.1小菜蛾總RNA提取及cDNA合成圖21.0%瓊脂糖凝膠電泳總RNA檢測Fig.2TotalRNAdetectionon1.0%agarosegelelectrophoresis注：由左及右依次為S、Rf、Rb。Note:S、Rf、Rbfromlefttoright通過BioTekEPOCH2檢測小菜蛾總RNA的提取質量，以ddH2O作為空白對照，結果表明，提取的小菜蛾總RNA的OD260/OD280值均在1.8～2.2之間，且濃度均大于500ng/μL，說明提取的RNA純度較好，無蛋白質和DNA污染。通過凝膠電泳檢測RNA完整性，結果顯示28S、18S和5S條帶清晰（圖2），由于昆蟲的總RNA在電泳條件下28SrRNA的氫鍵易斷裂（Winnebecketal.,2010），從而使28S亮度減弱�？芍猂NA樣品完整性良好，質量合格，可用于后續(xù)cDNA的合成。3.2.2引物驗證通過1.0%瓊脂糖凝膠電泳對PCR擴增目的片段的檢測結果顯示（圖3），產(chǎn)物片段大小與預期一致均在200bp以內(nèi)，目的條帶清晰單一，無引物二聚體及非特異性擴增條帶。依據(jù)Bustin等對qPCR引物質量提出的要求，從圖4中看所有引物擴增的溶解峰單一，且溶解溫度均大于80℃，通過圖5結果顯示R2均大于0.98，所有引物擴增的Ct-LogC斜率均在-3.58~-3.10之間，擴增效率均在90%~110%之間，均符合要求，說明引物質量合格，可以用于后續(xù)的熒光定量PCR實驗。
氟苯蟲酰胺抗性對小菜蛾生殖的影響機制初探23圖36對不同引物的小菜蛾PCR擴增結果1-6分別為RPS-13，β-actin，Vg，VgR，Tre，MetFig.3PCRamplificationresultsofP.xylostellawith6differentprimerpairs1-6areRPS-13,β-actin,Vg,VgR,TreandMetgeneinP.xylostella,respectively.圖4小菜蛾基因的熒光定量PCR溶解曲線A-F分別為RPS-13，β-actin，Vg，VgR，Tre，MetFig.4FluorescencequantitativePCRdissolutioncurveA-FareRPS-13,β-actin,Vg,VgR,TreandMetgeneinP.xylostella,respectively.
【參考文獻】：
期刊論文
[1]甜菜夜蛾卵黃原蛋白受體基因的RNA干擾[J]. 趙靜,陶蓉,郝德君,肖留斌,譚永安. 中國農(nóng)業(yè)科學. 2019(01)
[2]蛻皮激素對家蠶卵黃原蛋白基因表達的調(diào)控[J]. 沈關望,林英,呂毅華,王繼巖,邢潤苗,夏慶友. 中國生物化學與分子生物學報. 2014(11)
[3]三唑磷和毒死蜱亞致死劑量對大螟種群增長和卵黃蛋白含量的影響[J]. 楊國慶,李麗,戈林泉,吳進才. 應用昆蟲學報. 2014(06)
[4]蔥蠅海藻糖-6-磷酸合成酶基因的克隆、序列分析及滯育相關表達[J]. 李源,郝友進,張玉娟,司風玲,陳斌. 昆蟲學報. 2013(04)
[5]昆蟲海藻糖酶的基因特性及功能研究進展[J]. 唐斌,魏蘋,陳潔,王世貴,張文慶. 昆蟲學報. 2012(11)
[6]氯蟲苯甲酰胺對小菜蛾生長發(fā)育的亞致死效應研究[J]. 尹飛,馮夏,胡珍娣,李振宇,林慶勝,張德雍,陳煥瑜. 廣東農(nóng)業(yè)科學. 2012(17)
[7]三種殺蟲劑對褐飛虱海藻糖含量和海藻糖酶活性的影響[J]. 趙克非,戈林泉,程耀,吳進才,楊國慶. 昆蟲學報. 2011(07)
[8]昆蟲幾丁質合成及其調(diào)控研究前沿[J]. 張文慶,陳曉菲,唐斌,田宏剛,陳潔,姚瓊. 應用昆蟲學報. 2011(03)
[9]小菜蛾阿維菌素和蟲酰肼抗性品系對幾種新型藥劑的交互抗性研究[J]. 殷茜,錢路,曹廣春,韓召軍. 南京農(nóng)業(yè)大學學報. 2010(05)
[10]小菜蛾對阿維菌素的抗性風險評估及交互抗性的室內(nèi)測定[J]. 梁延坡,吳青君,張友軍,徐寶云,謝圣華,吉訓聰. 熱帶生物學報. 2010(03)
碩士論文
[1]江原鈍綏螨卵黃原蛋白基因的克隆與表達分析[D]. 高尚仁.南昌大學 2018
[2]抗氟苯蟲酰胺小菜蛾的轉錄組學和蛋白質組學研究[D]. 王成花.山東農(nóng)業(yè)大學 2018
[3]食物和殺蟲劑對黑肩綠盲蝽生長、發(fā)育和生殖的影響[D]. 劉陳.揚州大學 2017
[4]小菜蛾對雙酰胺類殺蟲劑的室內(nèi)與田間抗性的異同研究[D]. 秦超.山東農(nóng)業(yè)大學 2017
[5]小菜蛾保幼激素受體基因的分子特性及生殖調(diào)控作用研究[D]. 楊一帆.福建農(nóng)林大學 2017
[6]小菜蛾卵黃原蛋白受體基因的克隆與表達模式分析[D]. 王加偉.福建農(nóng)林大學 2016
[7]小菜蛾卵黃原蛋白基因的克隆、表達模式與功能分析[D]. 鄒明民.福建農(nóng)林大學 2015
[8]馬鈴薯甲蟲保幼激素合成與信號轉導相關基因的克隆和功能分析[D]. 周立濤.南京農(nóng)業(yè)大學 2013
[9]亞劑量氟鈴脲對昆蟲免疫的干擾機制及血細胞高通量藥物篩選[D]. 賀媛.華東理工大學 2011
[10]吡蟲啉對煙粉虱實驗種群的亞致死影響[D]. 吳咚咚.福建農(nóng)林大學 2009
本文編號：3509591
【文章來源】：山東農(nóng)業(yè)大學山東省
【文章頁數(shù)】：62 頁
【學位級別】：碩士
【部分圖文】：
小菜蛾對氟苯蟲酰胺的抗性發(fā)展規(guī)律
山東農(nóng)業(yè)大學碩士學位論文223.2不同品系/種群小菜蛾生殖相關基因表達差異與酶活性分析3.2.1小菜蛾總RNA提取及cDNA合成圖21.0%瓊脂糖凝膠電泳總RNA檢測Fig.2TotalRNAdetectionon1.0%agarosegelelectrophoresis注：由左及右依次為S、Rf、Rb。Note:S、Rf、Rbfromlefttoright通過BioTekEPOCH2檢測小菜蛾總RNA的提取質量，以ddH2O作為空白對照，結果表明，提取的小菜蛾總RNA的OD260/OD280值均在1.8～2.2之間，且濃度均大于500ng/μL，說明提取的RNA純度較好，無蛋白質和DNA污染。通過凝膠電泳檢測RNA完整性，結果顯示28S、18S和5S條帶清晰（圖2），由于昆蟲的總RNA在電泳條件下28SrRNA的氫鍵易斷裂（Winnebecketal.,2010），從而使28S亮度減弱�？芍猂NA樣品完整性良好，質量合格，可用于后續(xù)cDNA的合成。3.2.2引物驗證通過1.0%瓊脂糖凝膠電泳對PCR擴增目的片段的檢測結果顯示（圖3），產(chǎn)物片段大小與預期一致均在200bp以內(nèi)，目的條帶清晰單一，無引物二聚體及非特異性擴增條帶。依據(jù)Bustin等對qPCR引物質量提出的要求，從圖4中看所有引物擴增的溶解峰單一，且溶解溫度均大于80℃，通過圖5結果顯示R2均大于0.98，所有引物擴增的Ct-LogC斜率均在-3.58~-3.10之間，擴增效率均在90%~110%之間，均符合要求，說明引物質量合格，可以用于后續(xù)的熒光定量PCR實驗。
氟苯蟲酰胺抗性對小菜蛾生殖的影響機制初探23圖36對不同引物的小菜蛾PCR擴增結果1-6分別為RPS-13，β-actin，Vg，VgR，Tre，MetFig.3PCRamplificationresultsofP.xylostellawith6differentprimerpairs1-6areRPS-13,β-actin,Vg,VgR,TreandMetgeneinP.xylostella,respectively.圖4小菜蛾基因的熒光定量PCR溶解曲線A-F分別為RPS-13，β-actin，Vg，VgR，Tre，MetFig.4FluorescencequantitativePCRdissolutioncurveA-FareRPS-13,β-actin,Vg,VgR,TreandMetgeneinP.xylostella,respectively.
【參考文獻】：
期刊論文
[1]甜菜夜蛾卵黃原蛋白受體基因的RNA干擾[J]. 趙靜,陶蓉,郝德君,肖留斌,譚永安. 中國農(nóng)業(yè)科學. 2019(01)
[2]蛻皮激素對家蠶卵黃原蛋白基因表達的調(diào)控[J]. 沈關望,林英,呂毅華,王繼巖,邢潤苗,夏慶友. 中國生物化學與分子生物學報. 2014(11)
[3]三唑磷和毒死蜱亞致死劑量對大螟種群增長和卵黃蛋白含量的影響[J]. 楊國慶,李麗,戈林泉,吳進才. 應用昆蟲學報. 2014(06)
[4]蔥蠅海藻糖-6-磷酸合成酶基因的克隆、序列分析及滯育相關表達[J]. 李源,郝友進,張玉娟,司風玲,陳斌. 昆蟲學報. 2013(04)
[5]昆蟲海藻糖酶的基因特性及功能研究進展[J]. 唐斌,魏蘋,陳潔,王世貴,張文慶. 昆蟲學報. 2012(11)
[6]氯蟲苯甲酰胺對小菜蛾生長發(fā)育的亞致死效應研究[J]. 尹飛,馮夏,胡珍娣,李振宇,林慶勝,張德雍,陳煥瑜. 廣東農(nóng)業(yè)科學. 2012(17)
[7]三種殺蟲劑對褐飛虱海藻糖含量和海藻糖酶活性的影響[J]. 趙克非,戈林泉,程耀,吳進才,楊國慶. 昆蟲學報. 2011(07)
[8]昆蟲幾丁質合成及其調(diào)控研究前沿[J]. 張文慶,陳曉菲,唐斌,田宏剛,陳潔,姚瓊. 應用昆蟲學報. 2011(03)
[9]小菜蛾阿維菌素和蟲酰肼抗性品系對幾種新型藥劑的交互抗性研究[J]. 殷茜,錢路,曹廣春,韓召軍. 南京農(nóng)業(yè)大學學報. 2010(05)
[10]小菜蛾對阿維菌素的抗性風險評估及交互抗性的室內(nèi)測定[J]. 梁延坡,吳青君,張友軍,徐寶云,謝圣華,吉訓聰. 熱帶生物學報. 2010(03)
碩士論文
[1]江原鈍綏螨卵黃原蛋白基因的克隆與表達分析[D]. 高尚仁.南昌大學 2018
[2]抗氟苯蟲酰胺小菜蛾的轉錄組學和蛋白質組學研究[D]. 王成花.山東農(nóng)業(yè)大學 2018
[3]食物和殺蟲劑對黑肩綠盲蝽生長、發(fā)育和生殖的影響[D]. 劉陳.揚州大學 2017
[4]小菜蛾對雙酰胺類殺蟲劑的室內(nèi)與田間抗性的異同研究[D]. 秦超.山東農(nóng)業(yè)大學 2017
[5]小菜蛾保幼激素受體基因的分子特性及生殖調(diào)控作用研究[D]. 楊一帆.福建農(nóng)林大學 2017
[6]小菜蛾卵黃原蛋白受體基因的克隆與表達模式分析[D]. 王加偉.福建農(nóng)林大學 2016
[7]小菜蛾卵黃原蛋白基因的克隆、表達模式與功能分析[D]. 鄒明民.福建農(nóng)林大學 2015
[8]馬鈴薯甲蟲保幼激素合成與信號轉導相關基因的克隆和功能分析[D]. 周立濤.南京農(nóng)業(yè)大學 2013
[9]亞劑量氟鈴脲對昆蟲免疫的干擾機制及血細胞高通量藥物篩選[D]. 賀媛.華東理工大學 2011
[10]吡蟲啉對煙粉虱實驗種群的亞致死影響[D]. 吳咚咚.福建農(nóng)林大學 2009
本文編號：3509591
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