本文關(guān)鍵詞：不同源大腸桿菌耐藥性及整合子—基因盒研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：抗菌藥物在醫(yī)學(xué)臨床、養(yǎng)殖業(yè)等領(lǐng)域大量使用,使細(xì)菌的耐藥性不斷增加,多重耐藥現(xiàn)象越來越嚴(yán)重,這給我們敲響了警鐘,耐藥性問題引起了各國(guó)的重視。大腸桿菌作為腸道重要的棲居菌之一,承受著不同藥物的誘導(dǎo)和選擇壓力,導(dǎo)致大腸桿菌耐藥性十分嚴(yán)重,使其也成為耐藥基因儲(chǔ)庫(kù)和交換的重要場(chǎng)所。本次研究從不同地區(qū)采集食品動(dòng)物(豬,牛,雞)、寵物犬、大熊貓糞樣以及大熊貓生活環(huán)境樣本中分離、純化和鑒定出588株大腸桿菌。依據(jù)美國(guó)臨床實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化委員會(huì)(CLSI)推薦的紙片法及結(jié)果判斷標(biāo)準(zhǔn),對(duì)所有分離的大腸桿菌菌株檢測(cè)其對(duì)13種抗菌藥物的耐藥性。結(jié)果顯示,588株大腸桿菌對(duì)13種抗菌藥物呈不同水平的耐藥性(耐藥率在7.48-80.44%),其中對(duì)氨芐西林、四環(huán)素、氟苯尼考和復(fù)方新諾明呈很高耐藥性(耐藥率超過70%),而對(duì)左氧氟沙星,阿米卡星,頭孢噻肟則呈較低耐藥性(耐藥率低于14%)。93.5%的菌株呈多重耐藥性,多重耐藥菌株主要為5-11耐。不同來源菌株耐藥性比較發(fā)現(xiàn),寵物犬源大腸桿菌對(duì)環(huán)丙沙星、氨芐西林、頭孢噻肟和阿米卡星的耐藥率極顯著高于其他源菌株(P0.01)；食品動(dòng)物源菌株對(duì)氟苯尼考,鏈霉素,諾氟沙星,四環(huán)素、頭孢曲松和氨曲南藥物耐藥率高于其他來源菌株,尤其對(duì)氟苯尼考,頭孢曲松,氨曲南和復(fù)方新諾明的耐藥率與其他源菌株有極顯著差異性(P0.01)；大熊貓糞源和環(huán)境源菌株對(duì)多數(shù)藥物呈較低水平耐藥(耐藥率低于20.7%)。從588株大腸桿菌中隨機(jī)選取320株,通過PCR法擴(kuò)增其整合酶1型、2型和3型基因。結(jié)果顯示,食品動(dòng)物源菌株1類整合子檢出率最高為69.70%(138株/198株),其中,豬源、雞源和牛源分別為76.92%、71.79%和58.18%；犬源檢出率為64.10%；大熊貓?jiān)春铜h(huán)境源檢出率分別為50.75%和31.25%。2類整合子檢測(cè)發(fā)現(xiàn),2株豬源菌和2株雞源菌同時(shí)檢測(cè)出1型整合子和2型整合子；未檢測(cè)出3類整合子。隨機(jī)抽取145株1類整合子陽(yáng)性菌,對(duì)其基因盒可變區(qū)進(jìn)行PCR擴(kuò)增和測(cè)序,結(jié)果顯示：食品動(dòng)物源、犬源、大熊貓糞源及環(huán)境源菌株基因盒檢出率分別為91.36%、88.0%、58.82%和80.0%,檢出的基因盒共有7種,基因盒基因排列分別為dfrA27、dfrA17、aadA2, dfrA1-orfC, dfrA27-aadA2, aacA4-aadA1-catB2和dfrA12-orfF-aadA2。對(duì)4株2類整合子陽(yáng)性菌株基因盒可變區(qū)檢測(cè)發(fā)現(xiàn),有2種不同類型的基因盒,分別為dfrA1-sat2-aadA1(1株)和dfrA1-sat2(3株)。本次對(duì)食品動(dòng)物源、犬源、大熊貓糞源和環(huán)境源大腸桿菌耐藥性及整合子-基因盒研究發(fā)現(xiàn),不同源大腸桿菌對(duì)13種抗菌藥物呈不同水平的耐藥性,耐藥性與菌株來源有關(guān),其中犬源菌株耐藥性最嚴(yán)重,其次是食品動(dòng)物源,大熊貓糞源及其生活環(huán)境源菌株耐藥性較低,耐藥菌株呈多重耐藥性：耐藥菌株中廣泛攜帶1類整合子,整合子-基因盒分子特征以介導(dǎo)氨基糖苷類和磺胺-甲氧芐啶類耐藥的aadA和dfrA基因類型為主；菌株的耐藥表型與其所攜帶的基因盒有一定的相關(guān)性。
【關(guān)鍵詞】：大腸桿菌 不同源 耐藥性 整合子-基因盒
【學(xué)位授予單位】：四川農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：S852.61
【目錄】：

• 摘要4-6
• Abstract6-8
• 縮略詞表8-13
• 第一章 研究背景及目的意義13-26
• 1 研究背景13-25
• 1.1 大腸桿菌概述13-14
• 1.2 不同源大腸桿菌耐藥現(xiàn)狀14-16
• 1.2.1 寵物源大腸桿菌耐藥現(xiàn)狀14
• 1.2.2 食品動(dòng)物源大腸桿菌耐藥現(xiàn)狀14-15
• 1.2.3 野生動(dòng)物源及環(huán)境源大腸桿菌耐藥現(xiàn)狀15-16
• 1.3 大腸桿菌的耐藥機(jī)制16-18
• 1.3.1 酶對(duì)抗生素的修飾和水解17
• 1.3.2 抗生素作用靶點(diǎn)改變17
• 1.3.3 細(xì)菌細(xì)胞膜通透性改變17
• 1.3.4 細(xì)菌藥物外排系統(tǒng)17-18
• 1.3.5 耐藥基因的轉(zhuǎn)移機(jī)制18
• 1.4 整合子-基因盒系統(tǒng)18-25
• 1.4.1 整合子結(jié)構(gòu)及分類19-20
• 1.4.2 整合子的分布20-21
• 1.4.3 基因盒結(jié)構(gòu)和功能21-23
• 1.4.4 整合子-基因盒系統(tǒng)與大腸桿菌多重耐藥性的關(guān)系23-25
• 1.4.5 整合子的檢測(cè)方法25
• 2 研究目的及意義25-26
• 第二章 不同源大腸桿菌的分離鑒定及耐藥性檢測(cè)26-38
• 1 材料與方法26-30
• 1.1 材料26-27
• 1.1.1 樣品及來源26
• 1.1.2 標(biāo)準(zhǔn)菌株26
• 1.1.3 抗菌藥物藥敏紙片26
• 1.1.4 培養(yǎng)基26-27
• 1.1.5 細(xì)菌生化鑒定管27
• 1.1.6 其他試劑27
• 1.1.7 主要儀器與設(shè)備27
• 1.2 方法27-30
• 1.2.1 樣品采集27
• 1.2.2 大腸桿菌分離、鑒定及保存27-28
• 1.2.3 抗菌藥物的耐藥性檢測(cè)28-30
• 2 結(jié)果與分析30-35
• 2.1 大腸桿菌分離和鑒定30
• 2.2 大腸桿菌對(duì)13種抗菌藥物的藥敏結(jié)果30-31
• 2.3 不同源菌株對(duì)13種抗菌藥物耐藥情況比較31-33
• 2.4 588株大腸桿菌對(duì)13種抗菌藥物的多重耐藥性33-35
• 3 討論35-38
• 3.1 不同源大腸桿菌對(duì)13種抗菌藥物的耐藥情況35-36
• 3.2 規(guī)范使用抗生素,降低抗生素耐藥性36-38
• 第三章 不同源大腸桿菌整合子-基因盒的檢測(cè)38-55
• 1 材料和方法38-41
• 1.1 材料38-39
• 1.1.1 菌株38
• 1.1.2 試劑38-39
• 1.1.3 主要設(shè)備及儀器39
• 1.2 方法39-41
• 1.2.1 PCR檢測(cè)1、2、3型整合酶基因39-40
• 1.2.2 基因盒的檢測(cè)及鑒定40-41
• 2 結(jié)果與分析41-50
• 2.1 不同源大腸桿菌菌株整合子的檢測(cè)結(jié)果及分析41-43
• 2.1.1 PCR擴(kuò)增不同類型整合子的檢測(cè)結(jié)果41-42
• 2.1.2 不同源大腸桿菌1、2類整合子檢出情況及分布42-43
• 2.2 不同源大腸桿菌整合子.基因盒流行特征43-47
• 2.2.1 不同源大腸桿菌1類整合子-基因盒可變區(qū)PCR擴(kuò)增及測(cè)序43-46
• 2.2.2 不同源大腸桿菌2類整合子-基因盒PCR擴(kuò)增及測(cè)序結(jié)果46-47
• 2.3 整合子基因盒與耐藥表型的關(guān)系47-50
• 3 討論50-55
• 3.1 不同源大腸桿菌菌株整合子流行情況51-52
• 3.2 不同源大腸桿菌菌株整合子-基因盒的檢測(cè)52-53
• 3.3 整合子-基因盒與細(xì)菌耐性之間的關(guān)系53-55
• 第四章 結(jié)論和創(chuàng)新55-57
• 1 結(jié)論55-56
• 2 創(chuàng)新56-57
• 參考文獻(xiàn)57-65
• 致謝65-66
• 攻讀碩士期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文66

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4 王s

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