發(fā)布時間：2021-10-12 05:53

　　油茶是中國重點發(fā)展的木本油料作物,海南島是中國油茶資源分布最南緣地區(qū),資源和產業(yè)發(fā)展特色明顯。由于海南島油茶資源研究與開發(fā)利用起步晚,國內外對該資源的系統(tǒng)評價尚未開展,關于海南島油茶資源的分類問題仍無定論,這對海南島特異油茶資源的保護與創(chuàng)新利用、海南特色油茶產業(yè)發(fā)展極為不利。同時,油茶組物種的分類和歸并問題存在較大的分歧。此外,對包括海南島油茶資源在內的國內越南油茶資源進行評價,以進一步明確海南島油茶的資源特色,了解海南島油茶資源的遺傳多樣性水平和遺傳結構,為相關資源的創(chuàng)新利用和保護提供科學依據(jù)。因此,本研究對42個居群共867份油茶種質資源材料進行分子分析,基于ISSR和SRAP標記技術,分析山茶屬油茶組普通油茶、越南油茶、小果油茶、高州油茶、陸川油茶,以及香花油茶的分類地位與親緣關系,并對海南島油茶種質資源資源進行分類鑒定;同時,基于SRAP標記評價海南島油茶資源和中國越南油茶資源的遺傳多樣性,分析居群間的遺傳結構和分化。主要研究結果如下:（1）以海南島油茶基因組DNA為模板,采用單因素試驗和正交試驗相結合方法,建立海南島油茶SRAP-PCR最優(yōu)體系,即在20μL體系中包含:10×... 

【文章來源】：海南大學海南省 211工程院校

【文章頁數(shù)】：107 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

DNA瓊脂糖凝膠電泳檢測Fig.2-1AgarosegelelectrophoresisofgemomicDNA

海南大學碩士學位論文21圖2-1DNA瓊脂糖凝膠電泳檢測Fig.2-1AgarosegelelectrophoresisofgemomicDNA2.2.2海南島油茶SRAP-PCR單因素試驗（1）模板DNA用量對SRAP-PCR擴增PCR反應中模板DNA用量是關鍵因素之一。不同用量DNA模板對海南島油茶SRAP-PCR反應體系影響不大，本研究設置DNA用量梯度范圍內均能擴增獲得條帶，且清晰度和背景深度差異較�。▓D2-2）。當模板DNA濃度大于60ng時，條帶數(shù)量少且清晰度略低；當模板DNA濃度5~60ng時，條帶清晰，帶型保持一致。正交試驗選用5~60ng模板DNA用量梯度水平。圖2-2DNA模板用量和dNTPs濃度對SRAP-PCR反應體系的影響Fig.2-2EffectofconcentrationoftemplateDNAanddNTPsonSRAP-PCRreactionsystem注:M:100bpDNAMarker;1~10:1ng,5ng,20ng,40ng,60ng,80ng,100ng,120ng,160ng,200ng;11~20:0.025mmol/L,0.05mmol/L,0.1mmol/L,0.15mmol/L,0.2mmol/L,0.25mmol/L,0.375mmol/L,0.5mmol/L,0.75mmol/L,1.0mmol/LNote:M:100bpDNAMarker;1~10:1ng,5ng,20ng,40ng,60ng,80ng,100ng,120ng,160ng,200ng;11~20:0.025mmol/L,0.05mmol/L,0.1mmol/L,0.15mmol/L,0.2mmol/L,0.25mmol/L,0.375mmol/L,0.5mmol/L,0.75mmol/L,1.0mmol/L（2）dNTPs濃度對SRAP-PCR擴增PCR反應中dNTPs濃度影響擴增反應效率，濃度過低效率降低，條帶數(shù)量減少、

跎伲?邐?紉菜嬤?檔停?踔廖薹ü鄄斕�。因此�??皇匝檠≡?.05~0.20mmol/LdNTPs濃度梯度水平。（3）TaqDNA聚合酶用量對SRAP-PCR擴增TaqDNA聚合酶用量對PCR反應的最終結果影響重大，過低濃度的TaqDNA聚合酶會導致產物數(shù)量減少，甚至無法擴增，而高濃度的聚合酶又會導致非特異性擴增。當TaqDNA聚合酶濃度為1U以下時，條帶數(shù)量少且不清晰；TaqDNA聚合酶濃度為1U以上時，TaqDNA聚合酶濃度和產物擴增數(shù)量呈正相關；當TaqDNA聚合酶濃度為5U時，泳道10條帶模糊(圖2-3)。故正交試驗選擇1.5~4.0U的TaqDNA聚合酶濃度梯度水平。圖2-3Taq酶濃度和和引物濃度對SRAP-PCR反應體系的影響Fig.2-3EffectofTaqDNApolymeraseandprimerconcentrationonSRAP-PCRreactionsystem注:M:100bpDNAMarker;1~10:0.05U,0.25U,0.5U,0.75U,1U,1.5U,2.0U,3.0U,4.0U,5.0U;11~20:0.025μmol/L,0.05μmol/L,0.1μmol/L,0.2μmol/L,0.4μmol/L,0.5μmol/L,0.6μmol/L,0.7μmol/L,0.9μmol/L,1.2μmol/LNote:M:100bpDNAMarker;1~10:0.05U,0.25U,0.5U,0.75U,1U,1.5U,2.0U,3.0U,4.0U,5.0U;11~20:0.025μmol/L,0.05μmol/L,0.1μmol/L,0.2μmol/L,0.4μmol/L,0.5μmol/L,0.6μmol/L,0.7μmol/L,0.9μmol/L,1.2μmol/L（4）引物濃度對SRAP-PCR擴增引物濃度處于0.20~0.60μmol/L時，泳道14至泳道17的條帶清晰、穩(wěn)定，帶型一致；引物濃度低于0.20μmol/L時，泳道11至泳道13條帶數(shù)量較少且不清晰；當引物濃度高于0.60μmol/L時，泳道18至泳道20擴增出的條帶數(shù)量開始減少，清晰度也隨之減弱(圖2-3)。因此，本研究正交試驗選擇0.20~0.60μmol/L的引物濃度梯

【參考文獻】：
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[3]普通油茶優(yōu)良基因型的遺傳多樣性及雜交可配性研究[D]. 任衛(wèi).福建農林大學 2018
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本文編號：3432011