本文關(guān)鍵詞：FSTL3基因在綿羊常年發(fā)情中的功能研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：本實(shí)驗(yàn)旨在從分子水平和細(xì)胞水平上探究FSTL3在綿羊常年發(fā)情中的功能,來(lái)揭示FSTL3與綿羊繁殖季節(jié)性間的關(guān)系,為進(jìn)一步闡明綿羊常年發(fā)情的分子機(jī)理提供理論基礎(chǔ)。通過(guò)驗(yàn)證不同生理狀態(tài)下小尾寒羊和灘羊卵巢中FSTL3基因的表達(dá)差異情況,以常年發(fā)情的小尾寒羊卵巢顆粒細(xì)胞為研究對(duì)象,建立穩(wěn)定的綿羊卵巢顆粒細(xì)胞的原代培養(yǎng)體系,在細(xì)胞水平上對(duì)FSTL3基因進(jìn)行RNA干擾,利用Real-time PCR、Western-Blot以及免疫熒光技術(shù)分別在RNA水平和蛋白水平上驗(yàn)證FSTL3蛋白表達(dá)的抑制情況,并通過(guò)放射性免疫分析檢測(cè)FSTL3基因被干擾后顆粒細(xì)胞中雌二醇與孕酮濃度的變化,實(shí)驗(yàn)結(jié)論如下：1.通過(guò)RT-PCR檢測(cè)處于不同生理狀態(tài)下的小尾寒羊和灘羊卵巢組織中FSTL3基因的表達(dá)量,發(fā)現(xiàn)在兩種綿羊的卵巢組織中,FSTL3基因的表達(dá)水平均隨著發(fā)情周期呈波動(dòng)性表達(dá)：FSTL3基因的表達(dá)水平在發(fā)情間期達(dá)到頂峰,隨著發(fā)情周期逐漸下降,并在發(fā)情期降至最低。在秋季,小尾寒羊和灘羊發(fā)情期的FSTL3基因表達(dá)量沒(méi)有差異。在春季時(shí),灘羊處于乏情期,FSTL3基因的表達(dá)相對(duì)穩(wěn)定,保持在一個(gè)較低的水平；而小尾寒羊FSTL3基因的表達(dá)水平依然成周期性變化,為了探究FSTL3基因是否影響小尾寒羊的常年發(fā)情啟動(dòng),我們?cè)诩?xì)胞水平上進(jìn)一步研究。2.對(duì)原代培養(yǎng)的卵巢顆粒細(xì)胞進(jìn)行FSHR免疫熒光染色,結(jié)果顯示原代培養(yǎng)的卵巢顆粒細(xì)胞純度高,FSHR陽(yáng)性率達(dá)95%以上,可以直接進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。3.用RNAi的方法對(duì)小尾寒羊卵巢顆粒細(xì)胞中FSTL3基因表達(dá)進(jìn)行抑制,通過(guò)RT-PCR發(fā)現(xiàn)FSTL3基因的3條siRNA的干擾效率分別為62.33%、49.27%、85.84%,其中SiRNA-3能有效地干擾卵巢顆粒細(xì)胞中FSTL3基因的表達(dá)。4.在蛋白水平上驗(yàn)證RNAi的作用,Western-blot和細(xì)胞免疫熒光染色的結(jié)果表明,FSTL3干擾組的蛋白表達(dá)量極顯著降低(P0.01),說(shuō)明FSTL3蛋白被有效抑制。5.對(duì)RNAi后48h的細(xì)胞培養(yǎng)基進(jìn)行放射性免疫分析,結(jié)果顯示FSTL3基因的表達(dá)被抑制后,細(xì)胞培養(yǎng)基中的E2含量顯著增加(P0.05),P4的含量極顯著減少(P0.01),證實(shí)FSTL3基因?qū)︻w粒細(xì)胞分泌E2有一定負(fù)調(diào)控作用,對(duì)P4有正調(diào)控作用,進(jìn)一步表明FSTL3基因可能對(duì)綿羊的季節(jié)性繁殖有一定調(diào)控作用。
【關(guān)鍵詞】：FSTL3 小尾寒羊 顆粒細(xì)胞 RNAi
【學(xué)位授予單位】：四川農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：S826
【目錄】：

• 摘要5-6
• Abstract6-11
• 1. 文獻(xiàn)綜述11-20
• 1.1 動(dòng)物的季節(jié)性繁殖11-13
• 1.1.1 季節(jié)性繁殖的定義11
• 1.1.2 季節(jié)性繁殖的調(diào)控機(jī)理11-13
• 1.2 顆粒細(xì)胞的研究進(jìn)展13-16
• 1.2.1 顆粒細(xì)胞的生物學(xué)作用13-15
• 1.2.2 影響顆粒細(xì)胞增殖與凋亡的因素15-16
• 1.3 FSTL3的研究進(jìn)展16-18
• 1.3.1 FSTL3的結(jié)構(gòu)16
• 1.3.2 FSTL3的生物學(xué)機(jī)制16-18
• 1.4 本實(shí)驗(yàn)的研究?jī)?nèi)容和意義18-20
• 1.4.1 研究?jī)?nèi)容18
• 1.4.2 研究意義18-20
• 2. 材料和方法20-32
• 2.1 實(shí)驗(yàn)材料20
• 2.2 試驗(yàn)時(shí)間與地點(diǎn)20
• 2.3 主要試劑20-21
• 2.4 主要儀器設(shè)備21-22
• 2.5 試驗(yàn)方法22-32
• 2.5.1 卵巢顆粒細(xì)胞原代培養(yǎng)22-23
• 2.5.2 siRNA的設(shè)計(jì)與合成23
• 2.5.3 RNAi23-24
• 2.5.4 細(xì)胞免疫熒光染色24
• 2.5.5 細(xì)胞總RNA和蛋白質(zhì)提取24-26
• 2.5.5.1 RNA提取24-25
• 2.5.5.2 RNA濃度與質(zhì)量檢測(cè)25
• 2.5.5.3 蛋白質(zhì)提取25-26
• 2.5.5.4 蛋白質(zhì)濃度測(cè)定26
• 2.5.6 反轉(zhuǎn)錄26-27
• 2.5.7 熒光實(shí)時(shí)定量檢測(cè)27-29
• 2.5.7.1 引物設(shè)計(jì)合成27-28
• 2.5.7.2 標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋28
• 2.5.7.3 熒光實(shí)時(shí)定量28-29
• 2.5.8 Western-blot29-31
• 2.5.8.1 SDS-PAGE電泳29-30
• 2.5.8.2 轉(zhuǎn)膜30
• 2.5.8.3 免疫反應(yīng)30
• 2.5.8.4 化學(xué)發(fā)光30-31
• 2.5.9 放射免疫分析31-32
• 3. 結(jié)果與分析32-47
• 3.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線的構(gòu)建32-35
• 3.2 FSTL3基因表達(dá)分析35-36
• 3.3 卵巢顆粒細(xì)胞原代培養(yǎng)結(jié)果36-38
• 3.3.1 顆粒細(xì)胞形態(tài)學(xué)觀察36-37
• 3.3.2 FSHR免疫熒光染色檢測(cè)37-38
• 3.4 RNAi實(shí)驗(yàn)結(jié)果38-47
• 3.4.1 RNA濃度與質(zhì)量檢測(cè)結(jié)果38-40
• 3.4.2 蛋白質(zhì)濃度與質(zhì)量檢測(cè)結(jié)果40-41
• 3.4.3 FSTL3基因的siRNA篩選結(jié)果41-43
• 3.4.4 FSTL3蛋白表達(dá)分析43-45
• 3.4.5 FSTL3對(duì)顆粒細(xì)胞激素分泌影響的檢測(cè)45-47
• 4. 討論47-52
• 4.1 小尾寒羊顆粒細(xì)胞原代培養(yǎng)的建立47-48
• 4.2 RNAi抑制FSTL3基因的表達(dá)48-50
• 4.3 FSTL3對(duì)常年發(fā)情的調(diào)控作用50
• 4.4 FSTL3對(duì)顆粒細(xì)胞激素分泌的影響50-52
• 5. 結(jié)論52-53
• 6. 參考文獻(xiàn)53-61
• 致謝61-62
• 攻讀學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文62

【相似文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 姜丹丹;朗朗;季宇彬;;五味子中殘留農(nóng)藥對(duì)卵巢顆粒細(xì)胞的毒性研究[J];哈爾濱商業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版);2014年03期

2 靳曉霞;羅海玲;許旭;閆樂(lè)艷;葛素云;劉昆;袁飛;;綿羊血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子基因siRNA載體在卵巢顆粒細(xì)胞中的表達(dá)[J];中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào);2011年02期

3 孫晉艷;黃洋;張航;呂麗華;;FSH對(duì)體外培養(yǎng)豬卵巢顆粒細(xì)胞生長(zhǎng)及增殖的影響[J];山西農(nóng)業(yè)科學(xué);2011年05期

4 丁慧昕;董曉蓉;文利新;屠迪;鄔靜;袁莉蕓;;T-2毒素對(duì)大鼠卵巢顆粒細(xì)胞分泌激素的影響[J];中國(guó)獸醫(yī)雜志;2013年07期

5 邵康;吳小雪;盛晟;張佳;李維新;周杰;;組脂聯(lián)素對(duì)皖南花豬卵巢顆粒細(xì)胞性激素生成的影響[J];畜牧與獸醫(yī);2012年S1期

6 刁書(shū)永,袁慧;鎘對(duì)小鼠卵巢顆粒細(xì)胞凋亡的影響研究[J];畜牧獸醫(yī)學(xué)報(bào);2005年11期

7 高萍;鐘玉宜;張愛(ài)玲;;母豬卵巢顆粒細(xì)胞的分離培養(yǎng)及鑒定[J];廣東農(nóng)業(yè)科學(xué);2014年04期

8 高國(guó)龍;張錫強(qiáng);;玻璃化冷凍預(yù)處理方法對(duì)牛卵巢顆粒細(xì)胞的影響[J];黑龍江畜牧獸醫(yī);2012年17期

9 江中良;胡建宏;史懷平;王立強(qiáng);李青旺;;FGF1對(duì)牛卵巢顆粒細(xì)胞Spry基因表達(dá)的影響[J];西北農(nóng)林科技大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版);2011年02期

10 賀秀媛;朱翠娟;袁慧;張君濤;原維;李小波;朱家增;劉宗平;;醋酸鉛對(duì)小鼠卵巢組織結(jié)構(gòu)和卵巢顆粒細(xì)胞凋亡的影響[J];中國(guó)獸醫(yī)學(xué)報(bào);2010年02期

中國(guó)重要會(huì)議論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 朱翠娟;袁慧;朱家增;李小波;賀秀媛;張君濤;仝宗喜;王國(guó)瑾;劉宗平;;醋酸鉛對(duì)小鼠卵巢組織結(jié)構(gòu)和卵巢顆粒細(xì)胞凋亡的影響[A];中國(guó)畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)家畜內(nèi)科學(xué)分會(huì)2009年學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集[C];2009年

2 黃麗麗;;低劑量米非司酮對(duì)人卵巢顆粒細(xì)胞的影響[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第一屆全球華人婦產(chǎn)科學(xué)術(shù)大會(huì)暨第三次全國(guó)婦產(chǎn)科中青年醫(yī)師學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2007年

3 何泓;王少晶;翁慧男;李翠蘭;譚鷹;李維樞;蘇靜;陳見(jiàn)美;生秀杰;;卵巢顆粒細(xì)胞HOXA10基因的表達(dá)受睪酮調(diào)控[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第十次全國(guó)婦產(chǎn)科學(xué)術(shù)會(huì)議婦科內(nèi)分泌會(huì)場(chǎng)（婦科內(nèi)分泌學(xué)組、絕經(jīng)學(xué)組、計(jì)劃生育學(xué)組）論文匯編[C];2012年

4 羅新;陳舒;陳芳;王曉玉;蔣學(xué)風(fēng);帥翰林;;臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞修復(fù)化療所致卵巢顆粒細(xì)胞損傷的體外實(shí)驗(yàn)研究[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第十次全國(guó)婦產(chǎn)科學(xué)術(shù)會(huì)議婦科腫瘤會(huì)場(chǎng)（婦科腫瘤學(xué)組、婦科病理學(xué)組）論文匯編[C];2012年

5 楊宏敏;宋翠淼;杜惠蘭;;逍遙丸含藥血清對(duì)體外培養(yǎng)的人卵巢顆粒細(xì)胞內(nèi)分泌功能及FSHR表達(dá)的影響[A];中國(guó)中西醫(yī)結(jié)合學(xué)會(huì)生殖醫(yī)學(xué)分會(huì)首屆學(xué)術(shù)年會(huì)暨生殖醫(yī)學(xué)專業(yè)委員會(huì)成立大會(huì)論文匯編[C];2014年

6 倪江;朱輝;;大鼠多囊卵巢顆粒細(xì)胞凋亡的實(shí)驗(yàn)研究[A];面向21世紀(jì)的科技進(jìn)步與社會(huì)經(jīng)濟(jì)發(fā)展（下冊(cè)）[C];1999年

7 何曉紅;楊利國(guó);曹少先;;質(zhì)粒pEGS/2SS轉(zhuǎn)染對(duì)豬和牛卵巢顆粒細(xì)胞增殖和激素分泌的影響[A];第十次全國(guó)畜禽遺傳標(biāo)記研討會(huì)論文集[C];2006年

8 邵康;吳小雪;盛晟;張佳;李維新;周杰;;組脂聯(lián)素對(duì)皖南花豬卵巢顆粒細(xì)胞性激素生成的影響[A];全國(guó)動(dòng)物生理生化第十二次學(xué)術(shù)交流會(huì)論文摘要匯編[C];2012年

9 肖蘊(yùn)祺;倪迎冬;;Kisspeptin-10對(duì)雞卵巢顆粒細(xì)胞孕酮分泌的影響及機(jī)制研究[A];全國(guó)動(dòng)物生理生化第十一次學(xué)術(shù)交流會(huì)論文摘要匯編[C];2010年

10 郝紅娟;王惠蘭;張琰;張艷彬;;順鉑、VP-16、長(zhǎng)春新堿、博來(lái)霉素對(duì)人卵巢顆粒細(xì)胞影響的比較[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第三次全國(guó)絕經(jīng)學(xué)術(shù)會(huì)議暨絕經(jīng)相關(guān)問(wèn)題學(xué)習(xí)班論文匯編[C];2011年

中國(guó)博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前6條

1 程靜;微囊化卵巢顆粒細(xì)胞長(zhǎng)期體外培養(yǎng)及同種異體體內(nèi)移植的研究[D];浙江大學(xué);2010年

2 鄔靜;大鼠卵巢顆粒細(xì)胞體外生殖毒性評(píng)價(jià)替代模型的建立與應(yīng)用[D];湖南農(nóng)業(yè)大學(xué);2011年

3 孫美艷;鈣激活氯離子通道ANO1在卵巢顆粒細(xì)胞中的表達(dá)與功能[D];吉林大學(xué);2014年

4 夏天;補(bǔ)腎調(diào)沖方對(duì)大鼠卵巢顆粒細(xì)胞增殖與分泌及其相關(guān)基因表達(dá)的影響[D];天津中醫(yī)學(xué)院;2005年

5 李沛霖;補(bǔ)腎調(diào)沖含藥血清對(duì)離體大鼠卵巢顆粒細(xì)胞分泌功能與結(jié)構(gòu)的影響[D];天津中醫(yī)學(xué)院;2005年

6 魏兆蓮;二甲雙胍對(duì)PCOS患者卵巢顆粒細(xì)胞胰島素受體底物-1及P450芳香化酶的作用[D];安徽醫(yī)科大學(xué);2011年

中國(guó)碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 李攀;間充質(zhì)干細(xì)胞來(lái)源微囊泡對(duì)卵巢顆粒細(xì)胞的作用及機(jī)制研究[D];安徽醫(yī)科大學(xué);2015年

2 張永芳;二甲雙胍對(duì)多囊卵巢綜合征卵巢顆粒細(xì)胞胰島素受體底物-1及其磷酸化表達(dá)的影響[D];寧夏醫(yī)科大學(xué);2015年

3 鄒文兵;多種營(yíng)養(yǎng)素對(duì)燃煤型氟中毒雌鼠卵巢顆粒細(xì)胞凋亡干預(yù)作用研究[D];貴陽(yáng)醫(yī)學(xué)院;2015年

4 唐曉靜;黨參炔苷和木犀草素對(duì)卵巢顆粒細(xì)胞激素分泌的影響及其作用機(jī)制[D];中央民族大學(xué);2015年

5 雷夢(mèng)媛;FSTL3基因在綿羊常年發(fā)情中的功能研究[D];四川農(nóng)業(yè)大學(xué);2015年

6 張靜;端粒酶在卵巢顆粒細(xì)胞中的表達(dá)及其調(diào)控機(jī)理的研究[D];江西醫(yī)學(xué)院;2004年

7 凌志杰;骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞對(duì)卵巢顆粒細(xì)胞凋亡的作用研究[D];福建醫(yī)科大學(xué);2011年

8 尹巧芝;資沖顆粒對(duì)卵巢顆粒細(xì)胞產(chǎn)生雌激素影響的研究[D];成都中醫(yī)藥大學(xué);2003年

9 楊濤;微囊藻毒素LR致大鼠卵巢顆粒細(xì)胞氧化損傷及機(jī)制探討[D];福建醫(yī)科大學(xué);2011年

10 衛(wèi)紅霞;嗎啡對(duì)體外培養(yǎng)的人卵巢顆粒細(xì)胞MORmRNA表達(dá)的影響[D];山西醫(yī)科大學(xué);2007年

  本文關(guān)鍵詞：FSTL3基因在綿羊常年發(fā)情中的功能研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號(hào)：337058