本文關鍵詞：細胞外基質相關蛋白表皮生長因子和肌腱蛋白在仿刺參再生過程中的表達分析，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：海參有很強的再生能力,目前可以確定許多重要基因與再生過程的分子機制以及細胞間的信號通路相關。Fibropellin-ia基因的產物形成復雜的纖維狀結構且與其他透明層的組件一起構成細胞粘附的胞外基質。透明層是一個復雜的網狀結構,在胚胎發(fā)育的整個過程中都覆蓋在海參胚胎的周圍,在胚胎發(fā)育的某些特定時期,細胞可以在透明層上面進行附著和遷移。Tenascin蛋白表達在胚胎發(fā)育過程中以及成體正常組織的傷口愈合,神經再生等過程,且腫瘤組織細胞中也有明顯的表達。在本研究中,我們首次克隆了仿刺參中fibropellin-ia和tenascin的全長cDNA,實驗結果顯示日本仿刺參fibropellin-ia(Aj-fnia)cDNA全長1390個堿基,編碼199個氨基酸、tenascin(Aj-tenascin)為1366個堿基,編碼179個氨基酸。通過生物信息學方法分析了這兩個基因的結構和特點。通過實時熒光定量PCR和原位雜交(ISH)技術分析了仿刺參再生過程中的細胞外基質重塑的過程中這兩個基因的表達模式。結果發(fā)現,Aj-fnia和Aj-tenascin在再生組織的表達水平高于正常組織。在仿刺參進行吐臟處理后,Aj-fnia和Aj-tenascin在腸道和呼吸道的最高表達水平分別出現在第15日和20日。在體壁早期的再生階段,Aj-fnia和Aj-tenascin的最高表達水平出現在35分鐘和45分鐘,隨后,表達量均有所下降,然后在5至7 d再次出現表達量的峰值。原位雜交技術分析Aj-fnia和Aj-tenascin基因在仿刺參體內的體壁、縱肌、腸道和呼吸道樹中的表達部位的時發(fā)現:在體壁的表皮、真皮和結締組織中,腸道的黏膜和黏膜下層,呼吸樹的粘膜細胞及末端的一層或多層鱗狀上皮細胞中目的基因表達較多。所有上述這些發(fā)現均表明:Aj-fnia和Aj-tenascin在海參的再生過程中扮演了十分重要角色,是刺參再生的重要相關基因。
【關鍵詞】：仿刺參 細胞外基質相關 Fibropellin-ia(Aj-fnia)基因 Tenascin(Aj-tenascin)基因 表達模式
【學位授予單位】：遼寧師范大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：S917.4
【目錄】：

• 摘要4-5
• Abstract5-9
• 1 前言9-20
• 1.1 仿刺參的分類、形態(tài)特點9-11
• 1.1.1 仿刺參的分類和形態(tài)特征9
• 1.1.2 仿刺參的生活習性9-10
• 1.1.3 仿刺參的藥用和營養(yǎng)價值10
• 1.1.4 仿刺參的特殊生理特點10-11
• 1.2 仿刺參各組織器官的再生11-15
• 1.2.1 仿刺參吐臟后消化道的再生11-12
• 1.2.2 仿刺參吐臟后呼吸樹的再生12-13
• 1.2.3 仿刺參體壁創(chuàng)傷后的再生13
• 1.2.4 仿刺參創(chuàng)傷后縱肌帶的再生13-14
• 1.2.5 探究仿刺參再生的原理和機制14-15
• 1.3 細胞外基質—ECM15
• 1.4 Fibropellin-ia15-16
• 1.4.1 基因的家族成員介紹15
• 1.4.2 基因的結構和功能15-16
• 1.5 Tenascin16-19
• 1.5.1. 基因的家族成員介紹16-18
• 1.5.2. 基因的結構和功能18-19
• 1.6 實驗的目的及探究的意義19-20
• 2 材料和方法20-36
• 2.1 材料20-25
• 2.1.1 實驗材料20
• 2.1.2 主要試劑及藥品20-24
• 2.1.3 儀器與設備24-25
• 2.2 方法25-36
• 2.2.1 提取仿刺參總RNA25
• 2.2.2 獲取基因全長序列25-32
• 2.2.3 原位雜交32-35
• 2.2.4 熒光實時定量PCR35-36
• 3 結果36-51
• 3.1 基因全長的克隆36-42
• 3.1.1 Aj-fnia、Aj-tenascin基因EST片段36-37
• 3.1.2 Aj-fnia、Aj-tenascin基因 3’RACE片段37-38
• 3.1.3 Aj-fnia、Aj-tenascin基因 5’RACE片段38-39
• 3.1.4 Aj-fnia、Aj-tenascin基因全長序列39-42
• 3.2 生物信息學分析42-47
• 3.3 Aj-fnia和Aj-tenascin的表達部位47-49
• 3.4 實時熒光定量PCR檢測Aj-fnia和Aj-tenascin的轉錄表達水平49-51
• 4 討論51-54
• 4.1 Aj-fnia、Aj-tenascin基因結構和功能51-52
• 4.2 Aj-fnia、Aj-tenascin基因在仿刺參中表達部位的情況52
• 4.3 Aj-fnia、Aj-tenascin基因在各階段再生組織中的表達模式52-54
• 結論54-55
• 參考文獻55-62
• 攻讀碩士學位期間發(fā)表學術論文情況62-63
• 致謝63

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本文編號：336676