本研究使用了轉(zhuǎn)錄組測序技術(shù)、RT-PCR擴增技術(shù)以及透射電鏡觀察等實驗技術(shù),對遼寧沈陽地區(qū)采集到的桃葉衛(wèi)矛黃斑駁葉片樣品和藜皺縮葉片樣品進行分析。通過鑒定得出結(jié)論:桃葉衛(wèi)矛黃斑駁病癥伴隨的是這一癥狀的病毒是一種新病毒,該病毒屬于甲型線性病毒科（Alphaflexiviridae）馬鈴薯X病毒屬（Potexvirus）;藜葉片皺縮病癥伴隨的是豇豆花葉病毒科（Comovirinae）蠶豆病毒屬（Fabavirus）中的蠶豆萎蔫病毒2號（Broad Bean Wilt Virus 2,BBWV2）。本研究不僅發(fā)現(xiàn)了一種新的可以感染木本植物的病毒資源,擴充了植物病毒資源庫,還進一步豐富了已知病毒可侵染宿主的范圍,同時也部分奠定了植物病毒病防治的理論基礎(chǔ)。2018年7月,在遼寧沈陽地區(qū)采集到了表象癥狀為黃色斑駁的桃葉衛(wèi)矛疑似染病葉片。使用電子透鏡技術(shù)觀察到了大小約為500×13nm的線型病毒粒子。在后續(xù)實驗中使用轉(zhuǎn)錄組測序技術(shù)與RT-PCR分子克隆技術(shù)在該樣品分離物中擴增并得到一種Potexvirus屬病毒。完整的病毒基因組長度為6,784個核苷酸（不包括poly（A）尾巴）,其中包含5個開放閱... 

【文章來源】：沈陽大學(xué)遼寧省

【文章頁數(shù)】：58 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
第1章 緒論
    1.1 植物病毒的研究概況
    1.2 植物病毒的鑒定方法
        1.2.1 生物學(xué)測定法
        1.2.2 電子顯微鏡技術(shù)
        1.2.3 酶聯(lián)免疫法
        1.2.4 分子生物學(xué)測定法
        1.2.5 第二代測序檢測法(NGS)
    1.3 桃葉衛(wèi)矛與藜植物與病毒病害簡介
        1.3.1 桃葉衛(wèi)矛及其毒病
        1.3.2 藜及藜病毒病
    1.4 研究意義
    1.5 實驗方案
第2章 桃葉衛(wèi)矛病毒病的分子鑒定與分析
    2.1 實驗材料及試劑
        2.1.1 實驗材料
        2.1.2 菌株及質(zhì)粒載體
        2.1.3 實驗使用試劑
        2.1.4 主要實驗設(shè)備
    2.2 測序與設(shè)計引物
    2.3 實驗方法
        2.3.1 病毒電鏡觀察
        2.3.2 植物病毒總RNA的提取
        2.3.3 桃葉衛(wèi)矛上病毒的RT-PCR檢測
        2.3.4 PCR產(chǎn)物純化及回收
        2.3.5 DNA分子克隆
        2.3.6 重組質(zhì)粒的提取及鑒定
        2.3.7 序列分析
    2.4 實驗結(jié)果與分析
        2.4.1 桃葉衛(wèi)矛病葉樣品電鏡觀察結(jié)果
        2.4.2 RT-PCR檢測結(jié)果
        2.4.3 序列分析
    2.5 討論
第3章 藜病毒病的分子鑒定與分析
    3.1 實驗材料及菌株
        3.1.1 實驗材料
        3.1.2 感受態(tài)細胞及載體
        3.1.3 實驗試劑
        3.1.4 主要實驗設(shè)備
    3.2 引物的設(shè)計與合成
    3.3 實驗方法
        3.3.1 TRIzol法提取植物總RNA
        3.3.2 藜上病毒的RT-PCR檢測
        3.3.3 PCR產(chǎn)物純化及回收
        3.3.4 DNA分子克隆
        3.3.5 重組質(zhì)粒的提取與鑒定
        3.3.6 序列分析
    3.4 實驗結(jié)果與分析
        3.4.1 RT-PCR檢測結(jié)果
        3.4.2 序列分析
    3.5 討論
第4章 結(jié)論
參考文獻
在學(xué)期間研究成果
致謝


【參考文獻】：
期刊論文
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博士論文
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碩士論文
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本文編號：3330303