花生是世界范圍內(nèi)重要的油料與經(jīng)濟(jì)作物之一。在花生的脂肪酸組成中,油酸和亞油酸約占總脂肪酸的80%,其中油酸的氧化穩(wěn)定性是亞油酸的10倍,高油酸花生及其產(chǎn)品具有更長(zhǎng)的貨架期。油酸和亞油酸的比值（O/L）是評(píng)定花生油品質(zhì)的重要指標(biāo)。但是,不管是普通花生品種還是高油酸花生品種,同一品種其成熟度不同,O/L也具有顯著差異。AhFAD2是催化油酸生成亞油酸的關(guān)鍵酶,其表達(dá)調(diào)控決定了植物中油酸和亞油酸的比例,在生產(chǎn)上具有重要意義。在花生高油酸育種過(guò)程中,我們獲得了4種穩(wěn)定的FAD2A和FAD2B基因型（AABB,aaBB,AAbb和aabb）的花生材料�？紤]到AhFAD2A和AhFAD2B可能對(duì)其他FAD2成員表達(dá)的影響,利用這4種基因型花生為材料,研究了FAD2基因家族在不同成熟度影響種子油酸積累中的作用。本實(shí)驗(yàn)主要研究結(jié)果如下:1.根據(jù)中果皮顏色和厚度,將花生莢果發(fā)育分為4個(gè)時(shí)期,即白色厚皮期（S1）,白色薄皮期（S2）,棕斑薄皮期（S3）,黑斑薄皮期（S4）,并利用氣相色譜法對(duì)不同基因型不同發(fā)育時(shí)期種子的脂肪酸進(jìn)行測(cè)定,結(jié)果表明,不論在何種基因型中,隨著成熟度的增加,油酸含量升高,亞油酸含量... 

【文章來(lái)源】：山東師范大學(xué)山東省

【文章頁(yè)數(shù)】：79 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

脂肪酸合成途徑Figure1-1FattyacidsynthesispathwayACCase：乙酰輔酶A羧化酶；FAD2：油酸脫氫酶；FAD3：亞油酸脫氫酶；;FAS：脂肪酸合酶復(fù)合體；FAE：脂肪酸碳鏈延長(zhǎng)酶；FAT：脂酰-�；d體蛋白硫酯酶；LACS:長(zhǎng)鏈�；o酶A合成酶；KASⅡ：β酮脂

山東師范大學(xué)碩士學(xué)位論文4圖1-2不飽和脂肪酸的合成途徑[11]Figure1-2Thebiosyntheticpathwayofunsaturatedfattyacid1.1.3種子中脂肪酸的調(diào)控脂肪酸的合成反應(yīng)發(fā)生在質(zhì)體中，而TAG分子的組裝發(fā)生在質(zhì)體之外，并且可能與內(nèi)質(zhì)網(wǎng)（ER）有關(guān)[4,12,13]。在大多數(shù)種子中，碳是通過(guò)糖酵解以己糖或三糖作為進(jìn)入質(zhì)體的主要糖類來(lái)參與FA合成的。然而，綠色種子也可以用光供應(yīng)NADPH和ATP，這種替代途徑可以繞過(guò)糖酵解通過(guò)核酮糖1,5-二磷酸羧化酶和戊糖磷酸酶來(lái)實(shí)現(xiàn)。該途徑具有更高的碳效率，從而可將20%的乙酰-CoA用于油脂合成，而且也不需要從氧化戊糖磷酸途徑提供還原劑[14]。種子中脂肪酸的鏈長(zhǎng)（最多18個(gè)碳）和飽和程度是由質(zhì)體FA合成途徑?jīng)Q定的。乙酰輔酶A羧化酶（AcetylCoAcarboxylase，ACCase）是該途徑中第一個(gè)關(guān)鍵酶。ACCase受磷酸化，氧化還原狀態(tài)和PII相互作用的調(diào)控[15]，同時(shí)也

山東師范大學(xué)碩士學(xué)位論文28圖2-2FAD2promoter：GUS載體構(gòu)建Figure2-2ConstructionofFAD2promoter:GUSvector2.2.19農(nóng)桿菌感受態(tài)細(xì)胞的制備（1）取農(nóng)桿菌GV3101或LBA4404菌株，在加入抗生素（Rif+）YEP的平板上劃線，放置于28°C中倒置培養(yǎng)36-48h。（2）從培養(yǎng)好的平板中挑取單克隆于50mLYEP（Rif+）溶液中，放置于28°C，220rpm搖床中避光培養(yǎng)48h。（3）取40mL菌液置于1L的大三角瓶中，加入400mL含抗生素（Rif+）的YEP溶液擴(kuò)大培養(yǎng)3-4h。（4）當(dāng)擴(kuò)大培養(yǎng)的菌液OD值為0.5-1時(shí)，將菌液冰浴15min，然后分裝到預(yù)冷的離心管中，（4°C，4000rpm，10min）條件下離心。（5）棄上清，每個(gè)離心管中分別加入預(yù)冷的無(wú)菌水，配平，重懸，（4°C，4000rpm，10min）條件下離心。（6）棄上清，每個(gè)離心管中分別加入等體積10%的甘油，重懸后（4°C，4000rpm，10min）條件下離心。（7）棄上清，吸盡沉淀表面的溶液，再加入1mL10%甘油懸浮沉淀，合為一管，以50μL分裝到1.5mL的Ep管中，放置于-80°C保存。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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