牙鲆兩種免疫基因的克隆與表達(dá)分析
發(fā)布時(shí)間:2021-07-06 18:09
精氨酸酶Ⅱ(arginaseⅡ,Arg-Ⅱ)是精氨酸酶家族中的一種,目前已經(jīng)發(fā)現(xiàn)的精氨酸酶有Ⅰ和Ⅱ兩種亞型,兩者具有相似的結(jié)構(gòu)特征和酶特性,它們主要參與了有機(jī)體的尿素循環(huán),其區(qū)別在于各自的亞細(xì)胞定位、組織分布和免疫反應(yīng)不同。近期研究發(fā)現(xiàn)精氨酸酶Ⅱ在免疫反應(yīng)中也發(fā)揮了重要作用。核受體超家族由甾體激素、甲狀腺激素、維甲酸等化學(xué)信號(hào)的受體及配體未明的多種孤兒受體組成,該家族成員的主要功能是作為配體激活的轉(zhuǎn)錄因子,調(diào)控代謝、發(fā)育、生殖相關(guān)基因的表達(dá)。肝X受體(liver X receptor,LXR)屬于核受體超家族成員,不僅在脂質(zhì)代謝中發(fā)揮重要的作用,而且在調(diào)控巨噬細(xì)胞的炎癥反應(yīng)和免疫應(yīng)答中發(fā)揮著重要作用。ArgⅡ是巨噬細(xì)胞中LXRs的靶基因,LXRs上調(diào)精氨酸酶Ⅱ,ArgⅡ可以與iNOS競(jìng)爭(zhēng)性催化底物精氨酸,減少一氧化氮的合成,發(fā)揮抗炎效果。牙鲆(Paralichthys olivaceus)俗稱(chēng)牙片、比目魚(yú)、偏口等,是中國(guó)重要的海水養(yǎng)殖魚(yú)類(lèi)之一。因其具有極好的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值與經(jīng)濟(jì)價(jià)值而受到大家的喜愛(ài)。但是,由于過(guò)度捕撈使野生牙鲆數(shù)量銳減,同時(shí)工廠化養(yǎng)殖近親繁殖嚴(yán)重,使得種質(zhì)資源嚴(yán)重退化。而傳染...
【文章來(lái)源】:上海海洋大學(xué)上海市
【文章頁(yè)數(shù)】:65 頁(yè)
【學(xué)位級(jí)別】:碩士
【文章目錄】:
摘要
Abstract
引言
第一章 文獻(xiàn)綜述
1 核受體超家族概況
1.1 核受體超家族結(jié)構(gòu)及其分類(lèi)
1.2 肝受體X(LXRs)
2 精氨酸酶概況
2.1 精氨酸酶結(jié)構(gòu)及其分類(lèi)
2.2 精氨酸酶Ⅱ
3 硬骨魚(yú)中肝受體X(LXRs)及其靶基因精氨酸酶Ⅱ的研究進(jìn)展
3.1 魚(yú)類(lèi)中LXRs的研究
3.2 魚(yú)類(lèi)中精氨酸酶Ⅱ的研究
4 肝X受體(LXRs)和精氨酸酶Ⅱ的功能研究
4.1 肝 X 受體(LXRs)在免疫中的作用
4.2 肝受體X LXRs在生理和病理反應(yīng)中的作用
4.3 精氨酸酶在免疫中的作用
4.4 精氨酸酶在生理和病理反應(yīng)中的作用
第二章 牙鲆LXR基因的克隆、鑒定與表達(dá)分析
1 實(shí)驗(yàn)材料
1.1 實(shí)驗(yàn)用魚(yú)
1.2 主要試劑和儀器
2 實(shí)驗(yàn)方法
2.1 遲緩愛(ài)德華氏菌感染健康牙鲆實(shí)驗(yàn)
2.2 牙鲆各組織采樣
2.3 牙鲆吞噬細(xì)胞和淋巴細(xì)胞的體外培養(yǎng)
2.4 遲緩愛(ài)德華氏菌體外感染吞噬細(xì)胞和淋巴細(xì)胞實(shí)驗(yàn)
2.5 健康牙鲆各組織rna的提取和cdna的合成
2.6 牙鲆吞噬細(xì)胞和淋巴細(xì)胞的rna的提取
2.7 c DNA第一鏈的合成
2.8 LXR基因cDNA克隆驗(yàn)證
2.8.1 中間序列炎癥RCP引物和RACE引物合成
2.8.2 LXR中間序列驗(yàn)證
2.8.3 PCR產(chǎn)物純化
2.8.4 目的片段的連接與轉(zhuǎn)化
2.8.5 陽(yáng)性克隆的檢測(cè)和測(cè)序
2.8.6 3‘RACE-ready cDNA和 5‘RACE-ready cDNA的制備
2.8.7 牙鲆 LXR 基因的 c DNA 5'和 3'末端的快速擴(kuò)增(RACE)
2.9 序列和進(jìn)化分析
2.10 實(shí)時(shí)熒光定量PCR
3 結(jié)果與分析
3.1 牙鲆LXR基因的克隆
3.2 牙鲆LXR基因的序列比對(duì)和同源性分析
3.3 實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)結(jié)果
4.討論
第三章 牙鲆精氨酸酶Ⅱ基因的克隆、鑒定與表達(dá)分析
1 實(shí)驗(yàn)材料
1.1 實(shí)驗(yàn)用魚(yú)
1.2 總RNA的提取以及cDNA的合成
1.3 總DNA的提取
1.4 牙鲆精氨酸酶Ⅱ基因的克隆
1.5 序列分析和系統(tǒng)進(jìn)化樹(shù)分析
1.6 精氨酸酶Ⅱ基因的組織表達(dá)
1.7 精氨酸酶Ⅱ基因在遲緩愛(ài)德華氏菌感染后的表達(dá)
1.8 數(shù)據(jù)分析
2 結(jié)果與分析
2.1 牙鲆精氨酸酶Ⅱ基因的克隆分析
2.2 牙鲆精氨酸酶Ⅱ基因的序列比對(duì)和同源性分析
2.3 實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)結(jié)果分析
3.討論
總結(jié)與展望
參考文獻(xiàn)
碩士階段發(fā)表的論文
課題資助項(xiàng)目
致謝
【參考文獻(xiàn)】:
期刊論文
[1]牙鲆精氨酸酶基因片段的克隆及序列分析[J]. 劉華,施婷婷,施志儀. 廣東農(nóng)業(yè)科學(xué). 2016(12)
[2]半滑舌鰨CD40基因克隆及其免疫功能分析[J]. 位戰(zhàn)飛,郭華,李海龍,鄭衛(wèi)衛(wèi),王文文,戴歡,朱穎,劉洋,董忠典,陳松林. 中國(guó)水產(chǎn)科學(xué). 2016(05)
[3]香魚(yú)精氨酸酶Ⅱ基因的cDNA克隆及其表達(dá)與鰻弧菌感染的相關(guān)性[J]. 丁斐斐,李長(zhǎng)紅,陳炯,張琪. 生物技術(shù)通報(bào). 2016(02)
[4]精氨酸酶Ⅰ在HIV感染者外周淺表淋巴結(jié)中表達(dá)的研究[J]. 張乃春,黃磊,王松山,鄧建寧,盧祥嬋,吳峰耀,趙敏. 中華實(shí)驗(yàn)和臨床病毒學(xué)雜志. 2015 (01)
[5]草魚(yú)LXRα基因的克隆及表達(dá)研究[J]. 李超,劉品,曹艷姿,吉紅,林亞秋. 西北農(nóng)林科技大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版). 2014(06)
[6]精氨酸對(duì)動(dòng)物的營(yíng)養(yǎng)生理及免疫作用[J]. 孫紅暖,楊海明,王志躍,張得才,張芬芬,楊芷. 動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)學(xué)報(bào). 2014(01)
[7]飼糧添加不同水平L-精氨酸對(duì)泌乳母豬生產(chǎn)性能、血清氨基酸濃度和免疫生化指標(biāo)的影響[J]. 楊慧,林登峰,林伯全,王恬,張力. 動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)學(xué)報(bào). 2012(11)
[8]飼糧中添加不同水平L-精氨酸對(duì)妊娠母豬繁殖性能及血液生化指標(biāo)的影響[J]. 楊慧,林登峰,王恬,林伯全,李賀來(lái). 動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)學(xué)報(bào). 2012(10)
[9]L-精氨酸和乳酸菌對(duì)早期斷奶仔豬生長(zhǎng)性能、血液生化指標(biāo)和小腸黏膜形態(tài)的影響[J]. 楊慧,林伯全,張力,王恬,杜海江. 福建農(nóng)林大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版). 2012(04)
[10]T淋巴細(xì)胞免疫功能的研究進(jìn)展[J]. 周雄,胥志躍. 中國(guó)優(yōu)生與遺傳雜志. 2012(05)
碩士論文
[1]UT-B基因敲除小鼠腦中精氨酸酶Ⅰ的表達(dá)變化及炎癥反應(yīng)的發(fā)生[D]. 王琦.重慶醫(yī)科大學(xué) 2015
[2]精氨酸酶Ⅰ和誘導(dǎo)型一氧化氮合成酶在肝細(xì)胞癌中的表達(dá)及其相關(guān)性研究[D]. 陶璇.福建醫(yī)科大學(xué) 2012
[3]精氨酸對(duì)肉鴨生長(zhǎng)性能、免疫機(jī)能、胴體品質(zhì)和血液脂質(zhì)的影響[D]. 方勇軍.武漢工業(yè)學(xué)院 2009
本文編號(hào):3268725
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【學(xué)位級(jí)別】:碩士
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摘要
Abstract
引言
第一章 文獻(xiàn)綜述
1 核受體超家族概況
1.1 核受體超家族結(jié)構(gòu)及其分類(lèi)
1.2 肝受體X(LXRs)
2 精氨酸酶概況
2.1 精氨酸酶結(jié)構(gòu)及其分類(lèi)
2.2 精氨酸酶Ⅱ
3 硬骨魚(yú)中肝受體X(LXRs)及其靶基因精氨酸酶Ⅱ的研究進(jìn)展
3.1 魚(yú)類(lèi)中LXRs的研究
3.2 魚(yú)類(lèi)中精氨酸酶Ⅱ的研究
4 肝X受體(LXRs)和精氨酸酶Ⅱ的功能研究
4.1 肝 X 受體(LXRs)在免疫中的作用
4.2 肝受體X LXRs在生理和病理反應(yīng)中的作用
4.3 精氨酸酶在免疫中的作用
4.4 精氨酸酶在生理和病理反應(yīng)中的作用
第二章 牙鲆LXR基因的克隆、鑒定與表達(dá)分析
1 實(shí)驗(yàn)材料
1.1 實(shí)驗(yàn)用魚(yú)
1.2 主要試劑和儀器
2 實(shí)驗(yàn)方法
2.1 遲緩愛(ài)德華氏菌感染健康牙鲆實(shí)驗(yàn)
2.2 牙鲆各組織采樣
2.3 牙鲆吞噬細(xì)胞和淋巴細(xì)胞的體外培養(yǎng)
2.4 遲緩愛(ài)德華氏菌體外感染吞噬細(xì)胞和淋巴細(xì)胞實(shí)驗(yàn)
2.5 健康牙鲆各組織rna的提取和cdna的合成
2.6 牙鲆吞噬細(xì)胞和淋巴細(xì)胞的rna的提取
2.7 c DNA第一鏈的合成
2.8 LXR基因cDNA克隆驗(yàn)證
2.8.1 中間序列炎癥RCP引物和RACE引物合成
2.8.2 LXR中間序列驗(yàn)證
2.8.3 PCR產(chǎn)物純化
2.8.4 目的片段的連接與轉(zhuǎn)化
2.8.5 陽(yáng)性克隆的檢測(cè)和測(cè)序
2.8.6 3‘RACE-ready cDNA和 5‘RACE-ready cDNA的制備
2.8.7 牙鲆 LXR 基因的 c DNA 5'和 3'末端的快速擴(kuò)增(RACE)
2.9 序列和進(jìn)化分析
2.10 實(shí)時(shí)熒光定量PCR
3 結(jié)果與分析
3.1 牙鲆LXR基因的克隆
3.2 牙鲆LXR基因的序列比對(duì)和同源性分析
3.3 實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)結(jié)果
4.討論
第三章 牙鲆精氨酸酶Ⅱ基因的克隆、鑒定與表達(dá)分析
1 實(shí)驗(yàn)材料
1.1 實(shí)驗(yàn)用魚(yú)
1.2 總RNA的提取以及cDNA的合成
1.3 總DNA的提取
1.4 牙鲆精氨酸酶Ⅱ基因的克隆
1.5 序列分析和系統(tǒng)進(jìn)化樹(shù)分析
1.6 精氨酸酶Ⅱ基因的組織表達(dá)
1.7 精氨酸酶Ⅱ基因在遲緩愛(ài)德華氏菌感染后的表達(dá)
1.8 數(shù)據(jù)分析
2 結(jié)果與分析
2.1 牙鲆精氨酸酶Ⅱ基因的克隆分析
2.2 牙鲆精氨酸酶Ⅱ基因的序列比對(duì)和同源性分析
2.3 實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)結(jié)果分析
3.討論
總結(jié)與展望
參考文獻(xiàn)
碩士階段發(fā)表的論文
課題資助項(xiàng)目
致謝
【參考文獻(xiàn)】:
期刊論文
[1]牙鲆精氨酸酶基因片段的克隆及序列分析[J]. 劉華,施婷婷,施志儀. 廣東農(nóng)業(yè)科學(xué). 2016(12)
[2]半滑舌鰨CD40基因克隆及其免疫功能分析[J]. 位戰(zhàn)飛,郭華,李海龍,鄭衛(wèi)衛(wèi),王文文,戴歡,朱穎,劉洋,董忠典,陳松林. 中國(guó)水產(chǎn)科學(xué). 2016(05)
[3]香魚(yú)精氨酸酶Ⅱ基因的cDNA克隆及其表達(dá)與鰻弧菌感染的相關(guān)性[J]. 丁斐斐,李長(zhǎng)紅,陳炯,張琪. 生物技術(shù)通報(bào). 2016(02)
[4]精氨酸酶Ⅰ在HIV感染者外周淺表淋巴結(jié)中表達(dá)的研究[J]. 張乃春,黃磊,王松山,鄧建寧,盧祥嬋,吳峰耀,趙敏. 中華實(shí)驗(yàn)和臨床病毒學(xué)雜志. 2015 (01)
[5]草魚(yú)LXRα基因的克隆及表達(dá)研究[J]. 李超,劉品,曹艷姿,吉紅,林亞秋. 西北農(nóng)林科技大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版). 2014(06)
[6]精氨酸對(duì)動(dòng)物的營(yíng)養(yǎng)生理及免疫作用[J]. 孫紅暖,楊海明,王志躍,張得才,張芬芬,楊芷. 動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)學(xué)報(bào). 2014(01)
[7]飼糧添加不同水平L-精氨酸對(duì)泌乳母豬生產(chǎn)性能、血清氨基酸濃度和免疫生化指標(biāo)的影響[J]. 楊慧,林登峰,林伯全,王恬,張力. 動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)學(xué)報(bào). 2012(11)
[8]飼糧中添加不同水平L-精氨酸對(duì)妊娠母豬繁殖性能及血液生化指標(biāo)的影響[J]. 楊慧,林登峰,王恬,林伯全,李賀來(lái). 動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)學(xué)報(bào). 2012(10)
[9]L-精氨酸和乳酸菌對(duì)早期斷奶仔豬生長(zhǎng)性能、血液生化指標(biāo)和小腸黏膜形態(tài)的影響[J]. 楊慧,林伯全,張力,王恬,杜海江. 福建農(nóng)林大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版). 2012(04)
[10]T淋巴細(xì)胞免疫功能的研究進(jìn)展[J]. 周雄,胥志躍. 中國(guó)優(yōu)生與遺傳雜志. 2012(05)
碩士論文
[1]UT-B基因敲除小鼠腦中精氨酸酶Ⅰ的表達(dá)變化及炎癥反應(yīng)的發(fā)生[D]. 王琦.重慶醫(yī)科大學(xué) 2015
[2]精氨酸酶Ⅰ和誘導(dǎo)型一氧化氮合成酶在肝細(xì)胞癌中的表達(dá)及其相關(guān)性研究[D]. 陶璇.福建醫(yī)科大學(xué) 2012
[3]精氨酸對(duì)肉鴨生長(zhǎng)性能、免疫機(jī)能、胴體品質(zhì)和血液脂質(zhì)的影響[D]. 方勇軍.武漢工業(yè)學(xué)院 2009
本文編號(hào):3268725
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