犬新孢子蟲(chóng)（Neospora caninum）,簡(jiǎn)稱(chēng)新孢子蟲(chóng),是一種寄生于細(xì)胞內(nèi)的原蟲(chóng),其能夠引起中間宿主牛、羊等動(dòng)物生殖障礙等疾病和終末宿主犬及犬科動(dòng)物神經(jīng)系統(tǒng)紊亂等疾病。新孢子蟲(chóng)感染呈世界性流行,每年給世界養(yǎng)牛業(yè)造成嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失。目前為止,市面上沒(méi)有預(yù)防和治療新孢子蟲(chóng)病的商品化疫苗和特效藥,主要原因是人們對(duì)宿主與新孢子蟲(chóng)感染之間的免疫機(jī)制仍不清楚。近年來(lái)在宿主與新孢子蟲(chóng)感染之間的先天免疫機(jī)制研究上取得一定的成果。先天免疫系統(tǒng)通過(guò)宿主細(xì)胞表達(dá)的模式識(shí)別受體（PRR）識(shí)別入侵微生物的病原相關(guān)分子模式（PAMP）,隨后介導(dǎo)機(jī)體發(fā)生先天免疫防御反應(yīng),如通過(guò)炎性反應(yīng)釋放細(xì)胞因子和趨化因子等過(guò)程對(duì)入侵的病原快速識(shí)別和清除。本實(shí)驗(yàn)室前期研究發(fā)現(xiàn)新孢子蟲(chóng)感染腹腔巨噬細(xì)胞顯著上調(diào)NOD樣受體中NLRP3基因,并激活NLRP3炎癥小體來(lái)發(fā)揮抗新孢子蟲(chóng)的作用。NLRP3炎癥小體激活能夠分泌細(xì)胞因子IL-1β和IL-18,并介導(dǎo)其釋放到細(xì)胞外以發(fā)揮下游的免疫效應(yīng),但新孢子蟲(chóng)感染是如何誘導(dǎo)腹腔巨噬細(xì)胞中NLRP3炎癥小體活化并不清楚。新孢子蟲(chóng)感染犬中性粒細(xì)胞能夠誘導(dǎo)活性氧（ROS）依賴的胞外陷阱產(chǎn)生,因此... 

【文章來(lái)源】：吉林大學(xué)吉林省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁(yè)數(shù)】：89 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

多功能熒光酶標(biāo)儀檢測(cè)ROS的釋放Figure1.1TheROSreleasewasdetectedbymultifunctionalmicroplatereader

第二篇研究?jī)?nèi)容第1章新孢子蟲(chóng)誘導(dǎo)腹腔巨噬細(xì)胞中ROS產(chǎn)生211.3.1.2流式細(xì)胞儀檢測(cè)腹腔巨噬細(xì)胞中ROS的釋放我們通過(guò)流式細(xì)胞儀進(jìn)一步檢測(cè)新孢子蟲(chóng)感染小鼠腹腔巨噬細(xì)胞對(duì)細(xì)胞內(nèi)ROS水平變化的影響，結(jié)果發(fā)現(xiàn)同多功能熒光酶標(biāo)儀檢測(cè)結(jié)果一致，新孢子蟲(chóng)感染小鼠腹腔巨噬細(xì)胞能夠誘導(dǎo)ROS釋放增加，并且發(fā)現(xiàn)新孢子蟲(chóng)的感染量增加，ROS的釋放隨感染量呈依賴性增加。通過(guò)ROS抑制劑NAC預(yù)處理1h，發(fā)現(xiàn)新孢子蟲(chóng)誘導(dǎo)腹腔巨噬細(xì)胞釋放的ROS也降低，結(jié)果如圖1.2。圖1.2流式細(xì)胞儀檢測(cè)ROS的釋放A.流式細(xì)胞儀檢測(cè)ROS；B.平均熒光強(qiáng)度分析ROS水平Figure1.2TheROSreleasewasanalyzedusinganFACSAriaflowcytometerA.ROSwereexaminedbywayofFACS;B.ROSwerequantifiedbywayofmeanfluorescenceintensity1.4討論本研究所使用的宿主細(xì)胞為小鼠腹腔巨噬細(xì)胞，因?yàn)楦骨痪奘杉?xì)胞多存在于腹腔灌洗液中，其獲取途徑簡(jiǎn)單便捷，每次可大量收集，且收集的細(xì)胞純度高，目前涉及免疫應(yīng)答機(jī)制的研究大部分使用的都是腹腔巨噬細(xì)胞。本實(shí)驗(yàn)室前期研究已經(jīng)發(fā)現(xiàn)新孢子蟲(chóng)感染犬中性粒細(xì)胞能夠釋放胞外陷阱（NET），并且新孢子蟲(chóng)誘導(dǎo)胞外陷阱的釋放依賴于ROS的產(chǎn)生[8]。另外，也發(fā)現(xiàn)新孢子蟲(chóng)感染小鼠腹腔巨噬細(xì)胞能夠誘發(fā)先天免疫應(yīng)答，激活NLRP3炎癥小體[4]，但是新孢子蟲(chóng)作為胞內(nèi)病原體是通過(guò)何種分子效應(yīng)來(lái)活化NLRP3炎癥小體，目前并未有相關(guān)報(bào)道需要進(jìn)一步研究。因此本研究探究是否新孢子蟲(chóng)誘導(dǎo)小鼠腹腔巨噬細(xì)胞

第二篇研究?jī)?nèi)容第2章ROS介導(dǎo)新孢子蟲(chóng)感染巨噬細(xì)胞誘導(dǎo)的NLRP3炎癥小體調(diào)控胞內(nèi)蟲(chóng)體增殖34圖2.1ROS抑制劑NAC對(duì)NLRP3炎癥小體及胞內(nèi)蟲(chóng)體增殖的影響A.乳酸脫氫酶（LDH）的檢測(cè)；B.WesternBolt檢測(cè)IL-1β分泌及NLRP3表達(dá)；C.ELISA檢測(cè)細(xì)胞上清中的IL-1β；D.腹腔巨噬細(xì)胞中新孢子蟲(chóng)的感染率；E.熒光定量PCR檢測(cè)胞內(nèi)荷蟲(chóng)量；F.100個(gè)納蟲(chóng)空泡中新孢子蟲(chóng)計(jì)數(shù)Figure2.1EffectsofROSinhibitorNAConNLRP3inflammasomeactivationandparasiteburdeninN.caninumPMsA.TheLDHreleasewasmonitored；B.NLRP3expressionandIL-1βsecretionweredetectedbyWesternBlot；C.IL-1βinsupernatantswasmeasuredbyELISA；D.RateofN.caninuminfectedcellsinPMs；E.NumberofN.caninumininfectedPMswasassessedbyquantitativePCR.；F.Quantificationofparasitesin100parasitophorousvacuoles

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]不同藥物體外抑制新孢子蟲(chóng)的比較[J]. 謝素珠,李航,趙少偉,王浩,張煊承,張寧寧,賈立軍.  中國(guó)獸醫(yī)學(xué)報(bào). 2019(09)
[2]去甲斑蝥素誘導(dǎo)活性氧的產(chǎn)生介導(dǎo)SKOV3細(xì)胞凋亡和G2/M期周期阻滯[J]. 董秀,馮曉丹,王英,韓兆豐,王曉波,李海波.  中華中醫(yī)藥學(xué)刊. 2019(08)
[3]肺炎支原體經(jīng)ROS激活NLRP3炎性體誘導(dǎo)RAW264.7細(xì)胞分泌IL-1β[J]. 張涵,馬晶,張?jiān)屏?張樹(shù)明,許慶瑞,王偉明.  中國(guó)病理生理雜志. 2015(12)
[4]炎癥小體在對(duì)抗微生物感染中的作用[J]. 雷國(guó)偉,毛立明,李華,安利國(guó),楊桂文,孟廣勛.  中國(guó)細(xì)胞生物學(xué)學(xué)報(bào). 2011(12)
[5]新孢子蟲(chóng)病檢測(cè)方法研究進(jìn)展[J]. 徐曉芳,邢沈陽(yáng),李建華,張西臣.  中國(guó)病原生物學(xué)雜志. 2011(04)

碩士論文
[1]淫羊藿素誘導(dǎo)活性氧類(lèi)物質(zhì)產(chǎn)生抑制血液系統(tǒng)腫瘤作用研究[D]. 楊小菁.蘭州大學(xué) 2018



本文編號(hào)：3255028