發(fā)布時間：2021-06-15 13:43

　　遺傳轉(zhuǎn)化技術(shù)已經(jīng)成為生物學研究的重要手段之一,玉米高效遺傳轉(zhuǎn)化體系的建立對于玉米在生物學方面的研究具有重要的意義。玉米高效遺傳轉(zhuǎn)化體系的構(gòu)建可以從優(yōu)化培養(yǎng)體系、構(gòu)建高效遺傳轉(zhuǎn)化載體、篩選高效受體材料等方面入手。本研究對實驗室收集的64個玉米自交系進行了農(nóng)桿菌介導的遺傳轉(zhuǎn)化實驗,實驗過程中取材以及侵染階段的操作步驟均參考本實驗室最常用的實驗方法;實驗過程中使用的培養(yǎng)體系是本實驗室之前篩選出的適用于大多數(shù)玉米自交系的培養(yǎng)體系。本研究在對所有玉米自交系進行完整的遺傳轉(zhuǎn)化實驗以后,對轉(zhuǎn)化效率和獲得綠苗所用培養(yǎng)時間進行了統(tǒng)計分析,篩選出了113、130和166（具體材料名稱見補充表1）三種可用于玉米高效遺傳轉(zhuǎn)化體系構(gòu)建的受體材料,其轉(zhuǎn)化效率分別為11.99%、8.78%和9.09%,對照材料B104和Z31的轉(zhuǎn)化效率分別是13.16%和10.39%,三種材料的轉(zhuǎn)化效率與對照材料沒有明顯差距;三種材料獲得綠苗所用組織培養(yǎng)時間分別是51天、48天和45天,自交系B104和Z31的培養(yǎng)時間分別是55天和52天,三種材料的組織培養(yǎng)時間均較對照材料有所縮短。在本研究中,為了找出遺傳轉(zhuǎn)化過程中主要性狀與轉(zhuǎn)化... 

【文章來源】：山東農(nóng)業(yè)大學山東省

【文章頁數(shù)】：63 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

-1對照材料與供試材料的轉(zhuǎn)化效率

象。根據(jù)轉(zhuǎn)化效率統(tǒng)計結(jié)果來看，不同基因型材料的轉(zhuǎn)化效率差距十分明顯。其中自交系113的轉(zhuǎn)化效率為11.99%，低于B104的轉(zhuǎn)化效率，高于Z31的轉(zhuǎn)化效率，其有很大概率可用作玉米遺傳轉(zhuǎn)化的高效受體材料。為從實驗材料中篩選出更多的適合用于玉米遺傳轉(zhuǎn)化的受體材料，將19份自交系的轉(zhuǎn)化效率與B104的轉(zhuǎn)化效率進行差異顯著性分析如表3-1，其中沒有明顯差異的自交系共有5種，分別是111、113、130、135、166，轉(zhuǎn)化效率分別是6.06%、11.99%、8.78%、8.33%、9.09%，這5種材料將被進一步分析其用作高效玉米遺傳轉(zhuǎn)化受體材料的能力。圖3-1-2鑒定陽性苗的部分Bar試紙條使用情況Fig.3-1-2SituationofpartialofBarstripsforidentifyingpositiveseedlings3.1.2組織培養(yǎng)時間的統(tǒng)計分析相對于不經(jīng)過愈傷組織的玉米遺傳轉(zhuǎn)化體系，用幼胚作為受體誘導愈傷組織形成的體系試驗周期長，因此選用組織培養(yǎng)時間短的材料是縮短實驗周期的一種有效方法。本研究對所有材料從侵染過程到獲得再生綠苗（以第一株長度為3cm的健壯綠苗為準）所用的培養(yǎng)時間進行了統(tǒng)計，結(jié)果如表3-2，不同基因型材料的培養(yǎng)時間從42天到64天不等，可見基因型對于材料獲得再生綠苗的培養(yǎng)時間具有明顯的影響。對于轉(zhuǎn)化效率較高的5種材料，除111和135自交系外，其余自交系獲得綠苗所用培養(yǎng)時間均比B104和Z31的培養(yǎng)時間短，其中以166的培養(yǎng)時間最短，與B104和Z31相比分別縮短了10天和7天。從轉(zhuǎn)化效率和獲得綠苗所用培養(yǎng)時間兩個因素來看，本實驗篩選到的可用于高效玉米遺傳轉(zhuǎn)化的受體材料有3個，分別是113、130和166，其中以113的轉(zhuǎn)化效率最高，166的組織培養(yǎng)時間最短。

玉米高效遺傳轉(zhuǎn)化受體材料的篩選30為了驗證本實驗篩選到的三種材料分別在海南地區(qū)和在我國北方地區(qū)種植是否會對轉(zhuǎn)化效率產(chǎn)生影響，我們將B104、Z31和113、130、166五種材料分別在海南和山東泰安種植后的轉(zhuǎn)化效率進行了顯著性分析和相關(guān)性分析，結(jié)果見表3-3，我們發(fā)現(xiàn)這五種材料在海南地區(qū)和泰安地區(qū)種植后的轉(zhuǎn)化效率之間均不存在顯著差異，所以本表中相關(guān)性分析的R值不具有參考價值，但從顯著性分析可以看出這五種材料在海南地區(qū)和泰安地區(qū)種植后的轉(zhuǎn)化效率差異并不明顯。3.2遺傳轉(zhuǎn)化過程中的主要性狀對材料轉(zhuǎn)化效率的影響以材料的轉(zhuǎn)化效率作為受體材料轉(zhuǎn)化能力的主要參考依據(jù)保證了實驗結(jié)果的準確性，但要測得所有實驗材料的轉(zhuǎn)化效率卻會耗費大量的人力、物力和時間，為了能夠降低篩選高效玉米遺傳轉(zhuǎn)化受體材料的成本投入，本實驗將所有材料的瞬時轉(zhuǎn)化能力、穩(wěn)定轉(zhuǎn)化能力、初級愈傷組織誘導能力、胚性愈傷組織誘導能力和綠苗分化能力五個性狀進行了分析，并評估了其與材料轉(zhuǎn)化效率之間的關(guān)系。3.2.1瞬時轉(zhuǎn)化能力對轉(zhuǎn)化效率的影響圖3-2對照材料與供試材料的瞬時轉(zhuǎn)化率3DAI進行GUS染色，對照材料與供試材料的瞬時轉(zhuǎn)化率測定結(jié)果統(tǒng)計。誤差線表示的是三個

【參考文獻】：
期刊論文
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碩士論文
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[3]MS培養(yǎng)基和鈣濃度對馬鈴薯脫毒試管苗和試管薯生長的影響[D]. 劉臻曄.東北農(nóng)業(yè)大學 2016



本文編號：3231165